材料与仪器
步骤
一、NaHCO3液
1. 常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种，配制时，用三蒸馏水溶解后，过滤除菌，分装小瓶，盖紧瓶塞，4 ℃冰箱或室温下保存。
2. 或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可；可能有部分NaHCO3被破坏，但操作简单方便。
3. 消毒后要迅速封上瓶口，以免CO2逸出。
4. 调节溶液pH时，NaHCO3液要逐滴加入，并不时搅动培养液，以防加入过量，使pH值过度增高；如溶液内含有酚红指示剂，可按颜色变化判定。当pH值超过后，可用高压灭菌的10%醋酸溶液或通入CO2气体方法调节。
二、HEPES液
HEPES可按照所需的浓度，直接加入到配制的培养液内，再过滤除菌，通常配制成500 mM的浓度
1. 用200 ml双蒸水溶解47.6 克HEPES，用1 N NaOH调节pH 至7.5—8.0；
2. 过滤除菌后，分装小瓶，室温或4℃保存。
HEPES的使用，由于细胞的代谢作用，培养液很快变酸成黄色，pH 值下降。另一方面，在细胞接种量少，生长缓慢时，pH值要上升。这些对细胞的生长都不利，可以及时更换培养液，但培养基中营养并未耗尽，因此只调pH即可。调pH除用NaHCO3外亦可用氢离子缓冲剂，它们具有能较长时间控制恒定的pH值的作用，HEPES就是其中的一种。HEPES具有较强的缓冲能力；使用最终浓度一般为10—50 mM，可以根据缓冲能力的要求而定。
1. 常用的浓度有7.4%、5.6%、3.7%三种，配制时，用三蒸馏水溶解后，过滤除菌，分装小瓶，盖紧瓶塞，4 ℃冰箱或室温下保存。
2. 或用10 磅10 分钟高压蒸气灭菌亦可；可能有部分NaHCO3被破坏，但操作简单方便。
3. 消毒后要迅速封上瓶口，以免CO2逸出。
4. 调节溶液pH时，NaHCO3液要逐滴加入，并不时搅动培养液，以防加入过量，使pH值过度增高；如溶液内含有酚红指示剂，可按颜色变化判定。当pH值超过后，可用高压灭菌的10%醋酸溶液或通入CO2气体方法调节。
二、HEPES液
HEPES可按照所需的浓度，直接加入到配制的培养液内，再过滤除菌，通常配制成500 mM的浓度
1. 用200 ml双蒸水溶解47.6 克HEPES，用1 N NaOH调节pH 至7.5—8.0；
2. 过滤除菌后，分装小瓶，室温或4℃保存。
HEPES的使用，由于细胞的代谢作用，培养液很快变酸成黄色，pH 值下降。另一方面，在细胞接种量少，生长缓慢时，pH值要上升。这些对细胞的生长都不利，可以及时更换培养液，但培养基中营养并未耗尽，因此只调pH即可。调pH除用NaHCO3外亦可用氢离子缓冲剂，它们具有能较长时间控制恒定的pH值的作用，HEPES就是其中的一种。HEPES具有较强的缓冲能力；使用最终浓度一般为10—50 mM，可以根据缓冲能力的要求而定。
来源：丁香实验
