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        蛋白质呈色反应—双缩脲反应实验

        互联网

        22501

        【实验原理】

        当尿素经加热至180℃左右时,两分子尿素脱去一分子氨,

        进而缩合成一分子双缩脲。

        其在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物,此反应称为双缩脲反应。

        多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键,其结构与双缩脲分子中的亚酰胺键相同。因此,在碱性条件下与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的呈色反应。其反应过程如下:

        【 试剂 】

        1. 蛋白质溶液(鸡蛋清用蒸馏水稀释10倍,通过2-3层沙布滤去不容物)

        2.0.1%甘氨酸溶液

        3. 0.01%精氨酸溶液

        4. 10%NaOH溶液

        5. 1%CuSO4 溶液

        6.尿素结晶

        【实验操作】

        1. 双缩脲的制备

        取少许尿素结晶 (约火柴头大小)放入干燥的试管中,微火加热至尿素熔解至硬化,刚硬化时立即停止加热,此时双缩脲即已形成。冷却后加10%氢氧化钠溶液约1ml、并震荡,再加入1%硫酸铜溶液2滴,再震荡,观察颜色的变化。

        注意:

        a.在操作过程中试管不能冲向其他人以防止烫伤;

        b.控制加热的时间既不能过长也不能过短;

        c.加热时火不能太大,防止碳化。

        2. 观察现象

        另外取试管4支,按照下表加入各种 试剂 ,观察并解释现象。

        试剂

        管号

        1

        2

        3

        4

        蛋白质样液(ml)

        1.0

        0.01%精氨酸(ml)

        1.0

        0.1%甘氨酸(ml)

        1.0

        10%NaOH(ml)

        2.0

        2.0

        2.0

        2.0

        蒸馏 水(ml)

        1.0

        现象

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