hESC/iPSC 传代工作液（无酶）

产品描述

hESC/iPSC 传代工作液(无酶)(hESC/ iPSC Passage Solution(Enzyme free))适用于无滋养层依赖的干细胞的传代培养，具有温和，高效，使用普遍的特点，能将干细胞克隆消化为小团块进行传代，减少分化风险。

产品信息

表1. 试剂盒组成信息

储存条件

2~8℃，6个月。

使用方法

以hESC(H1)传代为例：

图1. hESC/iPSC完全培养基连续培养hESC(H1)细胞形态图：(A)和(C)分别为hESC(H1)细胞培养第2和4天时低倍镜hESC(H1)培养形态图示，(B)和(D)为培养至第2和4天时的高倍镜hESC(H1)培养形态图

1. 传代条件：① 细胞汇合度达85%左右(如图1(C-D)所示)，一般情况下每3-4天传代;

② 细胞汇合度较低，生长密度分布不均匀。

注：即使克隆团较小、汇合度不足，也建议不要连续培养超过5天。

2. 传代比例：可根据细胞生长状态和实验需要按1:5~1:12的比例进行传代，如果细胞正常，克隆团汇合度85%，大小均匀(如图1(C-D)所示)，建议按照1:8进行传代，如果密度偏低，则可降低传代比例;密度偏高，则增加传代比例。

注：1:8传代就是1个孔传8个孔(以6孔板为例)。

3. 将 Matrigel 包被的6孔板，hESC/iPSC Passage Solution(Enzyme free)，DPBS提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(~25℃)。

4. 根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的hESC/iPSC完全培养基，加入hESC/iPSC Supplement C终浓度为10uM，恢复至室温(~25℃)。

5. 将细胞六孔板孔内培养基吸弃，加入1 mL/孔的DPBS(不含钙镁)，轻轻摇晃后吸弃。

6. 加入1 mL/孔的 hESC/iPSC Passage Solution(Enzyme free)使溶液完全覆盖孔底。

7. 置于37℃培养箱中孵育5-7 min。

注：① 消化5-6 min后镜下观察细胞变化，当大部分细胞变亮变圆，且细胞尚未脱离基质，若大部分细胞仍未变亮，则需要延长消化时间，不超过8min;

② 保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触，使6孔板受热均匀，不要叠放。

图2：消化hESC(H1)细胞不同时间形态图：(A)消化5 min低倍镜hESC(H1)培养的的形态图;(B)消化6 min低倍镜hESC(H1)培养的的形态图。

8.消化时吸取6孔板中的Matrigel溶液，加入预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C 2 mL/孔。

9. 消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜，避免震荡摇晃细胞，倾斜并吸除hESC/iPSC Passage Solution(Enzyme free)。及时加入1 mL/孔预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C，将细胞吹下来。

注：① 加hESC/iPSC完全培养基 + hESC/iPSC Supplement C时，可轻柔吹打细胞不能超过2次，避免反复吹打;有部分细胞(10%～15%)未脱离基质是正常现象，若有大量细胞未脱离则需延长消化时间(< 8min)。

10.把这一毫升细胞悬液悬空滴加入板里的培养基，每孔3-5滴。在6孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人，水平十字摇匀3次。

注：可将传完代后的细胞在镜下观察细胞密度，根据密度调整是否需要多加细胞滴。

11.置于37℃，5% CO2浓度，饱和湿度的培养箱中，再次水平十字摇匀3次，不要叠放。

12. 18-24小时后换新的hESC/iPSC完全培养基，此后每天换液，第4天继续传代/冻存。

注：传代后隔天算第1天。