鉴定已经稳定转染细胞

feiqi：最近我从别人处拿到一种稳定转染的细胞，他让我用G418稳定细胞系，但是我不知道我所拿到的细胞是否真的稳定转染了我所需要基因，怎么进行鉴定？谢谢！

丁香园网友kevinfong认为：

第一，看看是不是G418抗性的。

第二，采用Western检测你所需的基因是否表达，但必需和内源性的比较，如果这个细胞本身不表达你的目的基因那就不需要比较了。

第三，你也可以提基因组做PCR看目的基因是否整合，这时PCR的产物一般会比内源性的基因片段小很多，除非这个基因没有内含子。复杂的检测方法可以根据一些文献做Southern，按他们的方法可以计算整合基因的拷贝数，具体我没做过，不是很清楚，你可以查一些相关文献，或请教其他战友。

丁香园网友feiqi认为：

用免疫荧光或用RT-PCR是否可以？谢谢！

丁香园网友kevinfong认为：

可以。也可以根据你目的基因的表达和分布来决定用那种方法。如果是膜蛋白的话，就可以用流式简单就可以检测和比较了。如果是胞内蛋白，那么也可以用免疫荧光了，但有时免疫荧光的背景不好控制，而且容易假阳性，这种情况下不好比较。如果你们的免疫荧光方法已经很成熟的话，那就没什么问题了。

RT-PCR可以，但最好做蛋白水平，才能反映目的基因真正表达。