非特异性酯酶组织化学染色法

羧酸酯水解酶或称酯酶(esterase)，是一类水解酯的酶，其作用是水解脂肪族酯和芳香族酯，催化反应式如下：

一般所指的脂酶是非特异性酯酶，无底物特异性。广义的酯酶包括特异性酯酶，有底物特异性。各种酯酶水解的底物和最适pH不尽相同。

非特异性酯酶主要定位于内质网和溶酶体，也可少量存在于线粒体和胞液内。它主要参与酯类代谢，也与蛋白质代谢有关。非特异性酯酶在胰腺外分泌部腺细胞、横纹肌运动终板及小肠上皮细胞呈强阳性反应；在肝细胞 、肾近端小管上皮细胞及结肠上皮细胞呈阳性反应。常用偶氮色素法显示非特异性酯酶活性，其原理如下：在酶的作用下，底物分解游离出来。

―萘酚，后者与重氮盐偶联形成偶氮色素，同时沉着于酶存在部位，通过偶氮色素的显色，间接证明酶存在部位。α―萘酚系统的物质可用重氮盐中坚牢蓝B、监牢蓝RR、监牢红RC盐，而萘酚AS系统的物质则用石榴石、可林思LB盐、固蓝B、固红RC、固红紫LC等。反应式如

偶氮色素法显示非特异性酯酶反应原理

(1)孵育液配制

α―醋酸萘酚 10mg

丙酮 0．25ml

0．1mol/L PBS(pH 7．4) 20ml

固蓝B盐 30rug

先将α―醋酸萘酚与丙酮混合并完全溶解后加入PBS，充分搅拌至液体清亮后加入固蓝B盐，搅拌后过滤，立即使用。

(2)染色程序：

①冰冻切片人孵育液中，室温10―60分钟或37℃10～1；分钟；

②蒸馏水洗；

③4％甲醛室温固定10分钟；

④自来水冲洗，蒸馏水浸洗；

⑤甘油明胶封固。

(3)结果：酶活性处呈砖红色，如用固红TR则为紫红色，用固红RC为暗红色，用固蓝RR则为青铜色。

非特异性酯酶醋酸萘酚同时似暇法染色：大鼠肾皮质呈砖红色为非特异性酯酶阳性反应

(4)对照实验：去底物反应结果为阴性。