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        非特异性酯酶染色实验

        相关实验:非特异性酯酶染色实验

        最新修订时间:

        原理

        NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。

        材料与仪器

        步骤

        一、 实验试剂:

        1. 作用液:l/20mol/L  磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂)0.8ml,充分振荡,直至最初产生的混浊物大部分消失为止,加重氮盐,(坚牢蓝B或其他种均可)40mg振荡,过滤后使用.

        2. 1g/L甲基绿水港派

        二、 实验操作:

        l. 固定新鲜涂片置10%甲醛生理盐水固定5min

        2. 流水冲洗5min

        3. 加入37℃作用液中1小时

        4. 水洗

        5. lg/L甲基绿水溶液复染5min

        6. 水洗,干后镜检.

        NaF抑制试验:方法同上,在 40ml作用液中加入氟化钠(NaF)6mg(每毫升作用液加NaF-l.5mg),若阳性明显减弱或呈阴性,示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率,其公式为:

        (加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值)×100%凡抑制率>50%者,提示确受NaF所抑.四. 实验判定结果:细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性,胞质内无沉淀者为阴性.

        常见问题

        1. 标本必须新鲜,应于取材后两天内染色,否则酶的活性显著降低.若冰箱内保存,可适当延长保存时间.

        2. 重氮盐的选择,以坚固蓝B.坚固蓝RR及坚固黑B重氮盐的染色为好.

        来源:丁香实验

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