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        免疫组织化学的对照怎么设置

        相关实验:免疫荧光技术

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        luckycan

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        3 个回答

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        做相关抗体预测实验,弄清楚抗体浓度,最好同时做抗体阳性和阴性对照

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        为了保证免疫荧光组织化学染色的准确性,排除某些非特异性染色,必须在初次试验时设置对照:

        1、直接法

        (1)标本自发荧光对照

        标本只加PBS或缓冲甘油封片,荧光显微镜观察组织内如果有荧光,称为自发荧光。

        (2)抑制试验

        可分为一步方法和二步方法。

        一步抑制方法:先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合,再加在标本上染色,结果应为阴性。

        二步抑制方法:标本先加未标记的特异性抗体,水洗后再加标记荧光抗体,结果应呈阴性或明显减弱的荧光。

        (3)阳性对照

        用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织化学染色,结果应呈阳性荧光。如对照1和2无荧光或弱荧光,3待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。

        2、间接法

        (1)自发荧光对照:同直接法。

        (2)荧光抗体对照:标本只加间接荧光抗体染色,结果阴性。

        (3)抑制试验:同直接法。

        (4)阳性对照:同直接法。

        结果:如对照(1)、(2)、(3)均呈阴性,阳性对照和待检标本呈阳性荧光则为特异性荧光。

        3、补体法

        (1)自发荧光对照

        (2)荧光抗体对照

        (3)抑制试验

        (4)补体对照:取新鲜豚鼠血清1:10稀释,先作用于标本,洗后再用抗补体荧光抗体染色,结果阴性。

        (5)抑制试验:标本加灭活的第一抗体,再加1:10稀释的新鲜豚鼠血清孵育后,再加未标记的抗补体血清与抗补体荧光抗体等量混合稀释液,结果应为阴性。

        (6)阳性对照。

        (1)~(5)结果阴性,(6)待检标本阳性时,则为特异性荧光。

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        Eason老歌迷

        有帮助

        可以用直接法,1标本自发荧光对照,标本只加PBS或缓冲甘油封片,荧光显微镜观察组织内如果有荧光,称为自发荧光。2抑制实验,先将荧光抗体与过量未标记特异性抗体作等量混合,再加在标本上染色,结果应为阴性。3阳性对照,用已知阳性标本做直接法免疫荧光组织化学染色,结果应呈阳性荧光。如对照1和2无荧光或弱荧光,3待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。

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