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        葡萄糖-6-磷酸酶组织化学染色法

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        4709

        葡萄糖 -6- 磷酸酶组织化学染色法

        葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6―phosphatase,G-6―P)定位于肝、肾、肠黏膜的微体及内质网内。主要有两方面的生理功能:一方面通过水解葡萄糖-6-磷酸释放葡萄糖来控制葡萄糖释放人血的量;另一方面,在一定条件下通过其磷酸转移酶活性合成葡萄糖-6-磷酸。

        糖尿病患者血糖浓度增高的同时,伴有葡萄糖-6-磷酸酶的磷酸转移酶活性增高,其作用是取代肝内的葡萄糖激酶,使葡萄糖转向糖原合成。

        铅法:葡萄糖-6-磷酸水解后所释放出磷酸,为硝酸铅所捕获,经硫化铵处理,最终反应产物为颗粒状的硫化铅沉淀。反应通式如下:
        葡萄糖―6―磷酸钠+H2 O 葡萄糖 -6- 磷酸酶 葡萄糖+磷酸 Pb(NO3 )2 Pb3 (PO4 )2 (NH4 )2 S PbS↓

        1)孵育液配制(新鲜配制)

        0.125%葡萄糖―6―磷酸钠 4ml

        0.2mol/LTris-顺丁烯二酸盐缓冲液(pH 7.4) 4ml

        2%Ph(N03 )2 (2.5%) 0.6ml

        蒸馏水 1.4ml

        充分混合后使用

        2)染色程序:

        ①新鲜组织冰冻切片;

        ②10%福尔马林固定5分钟后水洗;

        ③切片入孵育液中,37℃孵育20分钟水洗;

        ④人1%硫化铵水溶液中1分钟水冲洗;

        ⑤3%福尔马林后固定10分钟;

        ⑥甘油明胶封固。

        3)结果:

        酶活性处显棕色。

        4)对照实验:

        ①除去底物;

        ②以F―甘油磷酸钠代替底物;

        ③以0.01mol/L氟化钠作为抑制剂。

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