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        DNA电泳常见问题分析

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        问题

        原因

        解决办法

        DNA 带模糊

        1) DNA降解

        避免核酸酶污染

        2) 电泳缓冲液陈旧

        电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

        3) 所用电泳条件不合适

        电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

        4) DNA上样量过多

        减少凝胶中DNA上样量

        5) DNA样含盐过高

        电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

        6) 有蛋白污染

        电泳前酚抽提去除蛋白

        7) DNA变性

        电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

        不规则 DNA 带迁移

        1) 对于λ/Hin d III片段cos 位点复性

        电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟

        2) 电泳条件不合适

        电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液

        3) DNA变性

        以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热

        带弱或无 DNA

        1) DNA的上样量不够

        增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低

        2) DNA降解

        避免DNA的核酸酶污染

        3) DNA走出凝胶

        缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

        4) 对于EB染色的DNA,所用光源不合适

        应用短波长(254nm)的紫外光源

        DNA 带缺失

        1) 小DNA带走出凝胶

        缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

        2) 分子 大小相近的DNA带不易分辨

        增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度

        3) DNA 变性

        电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA

        4) DNA链巨大,常规凝胶电泳 不合适

        在脉冲凝胶电泳上分析

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