动物组织核糖核酸的制备及测定

目的和要求

1 学习和掌握用苯酚法及 盐溶液 法从动物组织提取核酸的原理及操作技术。
2 练习从动物组织提取RNA，并鉴定纯度。

实验原理

利用苯酚法可以直接从动物组织中提取RNA，组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水层中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后RNA即呈白色絮状沉淀析出。

操作步骤

1 称取3克肝组织，剪成小块，置于研钵中，加3-4滴90%的苯酚溶液后研磨，匀浆中加入15mL水，转移至三角烧瓶中，加10mL酚至三角烧瓶中。

2 室温下剧烈振荡45分钟，于3000rpm离心20分钟。

3 用吸管将上层液吸出，并加入1/2体积的氯仿-异戊醇，于低温下振荡20分钟，以除去提取液中的蛋白质，以2000rpm离心10分钟，吸出上层清液，向上清液中加入醋酸钾粉末，使最后浓度大约为2%，装入小 烧杯 后，一边搅拌，一边缓慢加入两倍于上清液体积的95%乙醇以沉淀RNA。

4 于冰浴中放置半小时后，以1000rpm离心5分钟，沉淀再用少量75%乙醇洗涤1-2次，收集沉淀，置于干燥器内干燥，称重。

5 测定A260/A280的值，应大于1.85，若小于1.85，则说明含杂蛋白和DNA高了。