- ￥1197.90
- 阿拉丁
- 上海
- R666020
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温
- 英文名：
RNApure Tissue&Cell Kit
- 库存：
期货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
R666020-50T
本试剂盒将高效的异硫氰酸胍裂解技术与硅基质膜纯化技术相结合，可从动物细 胞及组织中高效提取总RNA。起始样本一般最多30 mg组织或1 x 107细胞。本试剂盒 还可回收未完全纯化的RNA、体外转录和酶促反应后得到的RNA。用本试剂盒可提取 纯化分子量大于200碱基的高品质RNA，几乎无DNA残留。如果要进行对微量DNA非 常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase I在柱上进行消化去除。提 取的RNA可用于RT-PCR、Nothern Blot、Dot Blot等下游实验。
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自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇（新开封或提取RNA专用）。
实验前准备及重要注意事项
1．预防RNase污染，应注意以下几方面：
1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸 泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3）配制溶液应使用无RNase的水。
4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
3．使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀，可置于56℃加热重新溶液。Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，至终浓度为1%。如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙 醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5．所有离心步骤如无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。
6．若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I对 RNA进行处理。
操作步骤
1．样品处理
1a 组织：将组织在液氮中磨碎。每20-30 mg组织加600 μl Buffer RL（使用前检查 是否加入β-巯基乙醇），组织样本少于20 mg加350 μl Buffer RL。样品体积不超过 Buffer RL体积的十分之一。
1b 单层培养细胞：将细胞在培养瓶中直接裂解或处理成细胞悬液，离心得到细胞沉 淀，弃上清，每6-10 cm2 培养面积加入600 μl Buffer RL，小于6 cm2 加入350 μl Buffer RL，反复吹打几次，使其充分裂解。
1c 细胞悬液：12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟弃上清，得到细胞沉淀。每 5×106 -1×107 细胞加入600 μl Buffer RL，少于5×106 细胞加入350 μl Buffer RL，反 复吹打几次，使其充分裂解。
注意：
1）尽量除尽细胞培养基，细胞培养基可能抑制细胞的裂解影响RNA产量。
2）尽量使细胞充分悬浮并充分裂解，否则影响RNA产量。
2．样品充分裂解后，室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3．12,000rpm离心2-5 min，取上清进行下步操作。
4．加入1倍体积（600 μl或350 μl）的70%乙醇（无RNase水配制），混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
5．将步骤4所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RM）中，若一 次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱放回收集管中。 注意：吸附柱的最大载量为100 µg不要超载，否则会影响RNA的产量和纯度。
6． 向吸附柱中加入700 μl Buffer RW1, 12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液， 将吸附柱放回收集管中。
可选步骤：如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验，则用以下步骤替代步骤6。
1）向吸附柱中加入350 μl Buffer RW1, 12,000 rpm离心15秒，弃废液，将吸附柱重新 放回收集管中。
2）配制DNase I 混合液：取52 μl RNase-Free Water，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer 和20 μl DNase I (1 U/μl)，混匀，配制成终体积为80 μl的反应液。
注意: 以上体系为按照我公司产品DNase I 反应体系进行配置，应用其他公司产品请参考相应说明书。
3）向吸附柱中直接加入80 µl 配制好的DNase I 反应液，20-30℃孵育15分钟。
4）向吸附柱中加入350 μl Buffer RW1, 12,000 rpm离心15秒，弃废液，将吸附柱重新 放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前检查是否加入无水乙醇）, 12,000 rpm离 心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
8．重复步骤7。
9．12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
10.将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入30-50 μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃ 保存RNA，防止降解。
注意：
1）RNase-Free Wate体积不应小于30 μl，体积过小影响回收率。
2）如果要提高RNA的产量，可用30-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤10。
3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤10。
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文献和实验本制品是一种快速方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取总RNA。样品在RNAiso Reagent中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（下层)，RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。RNAiso Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一小时内便可以完成。经本制品提取的总RNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组 DNA，提取的RNA可以直接
，Pull Down, 转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从107个培养细胞或200mg动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2-～8℃ 产品特点： 1．提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验; 2．可以从50x107个培养细胞或50x200mg动物组织提取核蛋白; 3．整个实验过程只需要45分钟左右; 4．在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染; 5．
） 40、QuickSpin Versatile Total RNA Mini Kit 人或动物组织、培养细胞、细菌及酵母总RNA提取试剂盒 41、QuickSpin Plant Total RNA Mini Kit（植物及丝状真菌总RNA小量提取试剂盒） 42、OligoLink mRNA Capture Kit（mRNA富集或提取试剂盒） 43、NovaScience Total RNA isolation Reagent（NovaScience 总RNA提取试剂） 44、Nova
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