融化96孔板上的细胞

1. 准备下列试剂和材料：

96 孔 ES 细胞冻存板

24 孔 MEF 滋养板

塑料盒

ES 生长培养基

微量移液器

2. 在塑料盒内装入无菌水，置温箱中预热。

3. 从 -80℃ 冰箱中取出 96 孔 ES 细胞板。

4. 欲融化的每孔加 100 μl 预热（37℃）ES 生长培养基。盖上盖，在温箱内的塑料盒中放 2 分钟左右，使细胞快速融化。

5. 融化细胞转移到每孔有 2 ml ES 生长培养基的 24 孔 MEF 滋养板。

6. 孵育 3~5 小时，ES 细胞吸附。

7. 换 2 ml ES 生长培养基。

8. 3 天后孔中克隆可见。

9. 每 1~2 天换一次 ES 生长培养基。充分生长后，细胞 1:5 传代于 MEF 滋养板。