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        酶免疫电泳技术

        相关实验:酶免疫电泳技术

        最新修订时间:

        原理

        抗原与抗体在琼脂糖凝胶中电泳时,在碱性缓冲液的条件下,抗原带负电,向正极移动。不同分子量或还不同电荷的抗原,在相同条件下,移动距离不等。这些在不同部位的抗原,再与相关抗体经扩散形成免疫沉淀线。酶免疫电泳技术中的抗原与抗体就是酶和它的相应抗体球蛋白。酶抗原与酶抗体形成的免疫复合物是用底物显色的,由于酶反应的高度灵敏性,使酶免疫电泳技术成为一项灵敏度高的检测技术,但仅局限于酶蛋白的分析鉴定。

        材料与仪器

        步骤

        1.将小玻棒放在洁净的载玻片中央,然后将3ml溶化的琼脂糖溶液(0.8g琼脂糖/100ml巴比妥钠盐酸缓冲液)浇制其上,待冷凝后,用针尖挑去玻棒,中央出现一穴槽。


        2.在穴槽一端的两侧近边沿2mm处各打一小孔(直径2——3mm),在一孔穴中加入健株叶片汁液,在另一孔穴加入感染病毒的植株叶片汁液。


        3.加汁液的孔穴一端接负极,电泳缓冲液仍是0.1mol/LpH8.6巴比妥钠盐酸缓冲液,电压150V,电泳1h。


        4.在穴槽加入抗HRP兔血清,置于湿盒中,在37℃温箱中反应3h左右或室温过夜。


        5.在生理盐水中浸洗3——4天,每天换水3次。


        6.敷上干净的湿滤纸,置于40℃烘箱内烘干。


        7.浸入底物显色,从沉淀弧的形状,部位不同,比较健,病汁液所形成的沉淀线。

        常见问题

        1.阳性反应:在抗原抗体孔之间呈现明显的棕红色的线条。


        2.阴性反应:不出现棕红色线条者。

        来源:丁香实验

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