ELISA的分析中质量控制

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ELISA 实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏，强特异的优点。因此,应建立实验项目的标准操作程序(SOP)。

加样

◎加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板的1/3 处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

◎每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。

◎样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30 秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。

◎如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。

温育

◎抗原抗体反应需要在一定温度下（37°C），经过一定的时间才能达到反应的平衡点

◎ELISA 边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的1/3 处，不可将板条叠加放置。

◎边缘效应（2ng/mlHBsAg 一步法三种不同温育法的结果）

洗涤

◎ELISA 是靠洗涤来达到分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物的目的，同时洗涤也可将非特异吸附的蛋白质的干扰以及血球、细菌中的酶干扰清除掉。

◎手工洗涤一般采用浸泡方法：1）甩去孔内反应液；

2）用洗涤液过洗一遍（即注满孔后即甩去）；

3）微孔重新注满洗液后浸泡2-3 分钟，间歇摇动；

4）甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。

重复以上操作至少5 次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。

◎洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2 次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，避免堵孔。