临床免疫检验质量控制及应注意问题

北京大学人民医院检验科 张正

　　免疫检测目前涉及的范围极广泛，各种病原微生物抗体检测（特别是各型肝炎及艾滋病是各种医院必查项）。肿瘤标志物、一般免疫标志（如：免疫球蛋白、补体等）、激素等检测一般均归于免疫检测范围内。对一般全自动化免疫仪器，一般注意定期校准和做好室内和室间质控较容易，但涉及到酶标仪的工作的质控是较难进行的。以下讨论质控的一般概念及应注意事项。

一、质控目的

　　同其他专业一样，保证免疫检验质量，使其具有较高的重复性、准确性和各试验之间的结果可比性。原则及方法与其它专业质控类似。

二、免疫检验的标准化

　　免疫检验结果可比性很差，原因一是实验方法不统一，二是缺少用于参考比较的标准试剂，标准化迫在眉睫。

1 、方法标准化

（１）实验方法分类

①决定性方法

　　准确度高，系统误差小，测值接近真值。

　　用途：标准品检测；参考方法评价 ( 一般不用于常规工作 )

②参考方法

　　被决定性方法证实干扰因素少，测量结果可靠。

　　用途：鉴定常规方法；质控品定值 ( 有条件实验室可用于常规工作 )

③常规方法

　　有足够的精密度、准确性、特异性和适当分析范围。

　　用途：经方法评估和学术组织认可后推荐为常规方法。

　　例如： HBsAg 定量

　　决定性方法——紫外分光光度计测定蛋白

　　参考方法——高标记率固相放免

　　常规方法——酶标

（２）实验方法选择原则

①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、安全可行。

②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性均达到要求。

（３）方法的评估

　　参数设定 真阳性 TP ，真阴性 TN ，假阳性 FP ，假阴性 FN 。

①敏感性

　　患者中阳性百分率 ( 理想 100 ％ )

　　公式： × 100 ％

②特异性

　　非患者中阴性百分率 ( 理想 100 ％ )

　　公式： × 100 ％

③诊断指数

　　①十②，理想为 200 ％，不宜采用范围 (100 — 170 ％ )

④诊断效率

　　某试验性准确区分患者及非患者能力

　　公式： X100 ％

⑤阳性预测值

　　在所有阳性结果中真正患者百分率。 ( 理想 100 ％ )

　　公式： × 100 ％

⑥阴性预测值

　　在所有阴性结果中非患者百分率。 ( 理想 100 ％ )

　　公式 ： × 100 ％

2 、试剂标准化

（１）分级

① WHO 国际标准品

② WHO 国际参考品

③国家标准品

　　按国际标准品复制的标准品，效力单位与①严格一致。

④研究室或厂家标准品

　　暂时用于工作的标准品，自行效价，但有国际标准品后，必须标化。

⑤免疫学质控标准品和参考品

　　一般用国际标准品或国际参考品标化的用于质控的物质。

（２）免疫常用国际标准品和参考品

　　免疫学检验质控常用国际标准品和参考品

三、常用免疫质控

1 、质控一般要求

（１）标本收集及处理

　　每种标本有一定收集要求，应与临床医生、负责取血者及运送标本者交代清楚以便配合。有些标本要求特殊，应特别注意，例如测补体标本不能存于室温或 4 ℃ 活化影响检测。 HBeAg 不能反复冻融，破坏蛋白。

（２）仪器的校准与标定 ( 以酶标仪为例 )

　　在免疫检测中酶标仪是最常使用的仪器，仪器的校准一定要定时进行（一般使用频繁不超过半年，一般使用不超过一年）。校准应在仪器购买时请厂家对性能光路等校准并给出参数。此时，应做功能校准，选取定值校准品（含不同滴度及阴、阳标本） 4-5 天检测。其中对实验影响较大的加样器及水浴用温度计均应进行计量校准后使用，前者可采用称重法校准，后者可到国家计量单位进行。

（３）对照及质控品

　　对照（一般指阴、阳对照）最好使用与被测样品同类物质。质控品一般可来自质控控制单位（如：各级临检中心），必要时可自制，但最好应与有溯源性标准物质进行比对。定量者可制作标准曲线。自身抗体等可使用国际通用阳性对照血清。质控品一般应包括高、中、低三种滴度。

2 、酶标方法实验的质控

（１）实验前

　　特别要注意标本要求不溶血、无乳糜，并注意贮存温度。仪器应做好校准和标定。其中酶标仪在购买时应注意到厂家提供的光路校准及技术要求，（注意最好无漂移）。安装后要进行功能校准。定性校准选阴性，高、中、低值阳性血清各 2 份连续进行 5天检测。定量校准在 96 孔板上选 20 处，随机测定，结果与标定值比较应在 ± 2SD 内。加样器应定期校准。水浴箱除对温度计校准外，每次实验时温度计均应复测。

（２）实验中

① 按校准程序操作，不得随意减省操作步骤。

②质控分为室内和室间质控。

　　一般室内质控应据工作量多寡决定间隔时间。质控物质可购买或自己标定，但要注意应有高、中、低值阳性质控品及阴性质控品。一定要设立低值者。除定期开展质控外，在实验不稳定时要及时做。特别注意要每月做图总结。对失控应有记录并分析原因提出处理意见。在判断失控上可使用 Westgard 规则，特别要注意以下几种情况。

　　Ａ： l 2S ：一质控点在 ± 2S 之外应警惕。

　　Ｂ： R 4S ：连续 2 个质控点相差 >4S 。

　　Ｃ： 4 1S ：连续 4 个质控点落同侧± 1S 之外。

　　Ｄ：７ X ：连续 7 个质控点落均值一侧。

　　Ｅ： 7 ↑／↓：连续 7 个质控点均↑或↓同一周期变化。

（３）实验后

　　质控时还应注意收集临床资料，随时调整。

（４）开展质控特别应注意的几个问题

①试剂盒内阴、阳对照与质控不完全相等

　　临界值质控品是保证实验质量的关键。

　　作用：

　　Ａ：控制灵敏度，可测试剂盒灵敏度是否达标。

　　Ｂ：控制精密度，连测 20 次，可获得均值 和标准差 SD 。做质控图，控制室内精密度。

②室内质控不合格的失控处理

　　Ａ：停止发放报告。

　　Ｂ：查找原因：质控品是否有效，试剂、仪器及操作等，必要时重校准仪器，做试剂比对。重新合格后报告负责人方能发出报告。

③关于室间质控

　　Ａ：如部、市均未开展室间质评的试验应定时比对 ( 例：抗 HP)

　　Ｂ： 80 ％以下得分应找原因及时纠偏。