传代培养

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

问：复苏的肿瘤细胞传代多久后，弃之不用并解冻新的细胞？在传代的过程中， 有时细胞长得太满， 都开始死亡了才传，对细胞有什么不良的影响，有没有固定的传代间隔时间？ 答：rumex认为培养的代数因细胞不同而不同，肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。 ...

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞：贴壁细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、 ...

问：我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样。一般传代（1传2）后大概16－20个小时左右就能够长到90％，请问是应该一定等到24小时再传代，还是可以等长到90％（<24小时）如果没到24小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？ 答：很多试验中要求分盘后24h时再开始实验 ...

胰酶使用注意： 1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。 2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 贴壁细胞的消化： 1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清 2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同） ...

丁香园网友freett的问题为： 我是新手，第一次培养细胞，按照师姐的配方配了0.05%EDTA－trypsin但发现消化了十五分钟后，细胞还是基本上全贴在瓶壁上，请问各位高手，这可能是什么原因？ 丁香园网友重剑无锋的观点为： 1、最有可能是你的培养液没有去除干净，因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA. 2、加大EDTA的浓度 ，可以选择0.1％与trypsin混合使 ...

丁香园网友mmlirx的问题为： 我的细胞消化多度了，当时看到都哗哗的往下掉了。现在养了两天，有些飘起来，也有两三个聚在一起，也有挺多帖璧的，但是感觉状态还不好。由于科室没有此细胞的冻存，所以得养好。大哥大姐，现在有有什么好的办法补救下？ 丁香园网友wxgang的观点为： 马上用培养基中和，用吸管吹打细胞，收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培 ...

丁香园网友doctorfri的问题为： 我的细胞消化完后不贴壁请教各位何原因. 目前已基本排除以下原因: 1、培养基和血清 2、培养瓶及装培养基和血清的瓶 3、操作的问题 4、胰酶及消化时间的问题 丁香园网友gkxmj的观点为： 1、消化过度，用酶消化时，见细胞开始变圆时既终止消化，用吸管轻轻吹打即可，消化过度，24小时后可见细胞成簇，形态不规则。 2、培养瓶 新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多 ...

丁香园网友zyz00的问题为： 我刚买了一瓶MCF-7细胞，用胰酶消化了10分钟，吹打了几百下，细胞还是没分散开，传代后贴壁也不是太好，怎么办那？。 丁香园网友huananhu的观点为： 我没有养过这种细胞，但是我养过鼻咽癌细胞。这种细胞的贴壁能力很强，用0.5%胰酶（含0.1%EDTA）一般要消化12~15min。我的经验是细胞用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化（避免细胞 ...

贴壁细胞消化传代的简单方法: 丁香园网友jinliangyang的观点为： 贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。 本人介绍一种简单的消化传代方 ...

细胞培养名称：新生大鼠皮质星形胶质细胞培养 组织来源：种属：大鼠 年 龄：新生1天-2天 取材部位： 皮质 选用的酶：0.125%胰酶 消化时间：37度15min 注意事项：胰酶平时用1.5ml EP管分装冻存，用时解冻，37预温1min，以保持胰酶好的活性，消化时每隔5min轻轻摇动消化组织。 细胞培养名称：成年大鼠室下区星形胶质细胞培养 组织来源：种属：大鼠 年 龄：成年2.5月零 取材部 ...

一、酶消化法。 1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。 2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温 ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...