基础实验

管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。其中，芽孢悬液的制备就有很多需要注意的地方。在用管碟法检定抗生素时，需要将菌悬液与培养基混合均匀、覆盖在底层培养基上，以形成抑菌圈。其中，对于菌悬液的制备要求为：将所用菌的斜面培养物用 1～2 ml 灭菌水洗下，形 ...

1. 准备 NZY agar plates（至少用前 24 小时倒好） ，用前在37℃培养箱中烘烤1-2 小时以去除水滴。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分，离心10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌浓度为 OD600=0.5。 3. 融化 NZY top，并将 NZY top 放在 50℃水浴中。 4. 将适量的 XL1-blue ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养 ...

1、铺平板感染培养物的制备： 对直径为10cm的培养皿，取105pfu的噬菌体（通常约为一个噬菌斑重悬液的1/10或一个大噬菌斑重悬液的1/100）与0.1ml铺平板细菌混匀。 对直径为15cm的培养皿，去2×105pfu的噬菌体与0.2ml铺平板细菌混匀。 至少要置一个含为感染细胞的对照管，将感染培养物和对照均置于37℃培养20min，将病毒吸附到细胞上。 如果制备不易生长的&la ...

Introduction: The phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure digests bacterial RNA and DNA precipitates the pha ...

Inoculate 5 ml of lambda-broth in a glass culture tube with a single colony of an appropriate host strain of E. coli. Incubate the culture on a roller at 37°C overnight. Transfer the culture to ...

Purpose: Mini-prep method for lambda phage DNA purification from lysates. Time required: 4 hours once the lysate is in hand Special supplies required: BioRad Econo Columns (Cat.# 731-1550) Whatman ...

一. 液体培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时 2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。 3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中，于适当温度下振荡培养约8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 4. 将培养液移入离心管中，以10000 rpm (5000 g)离心10分钟 ...

一、目的： 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、原理： 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极其微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清，或在含有 ...

噬菌体滴度的测定 在宿主细胞过量的情况下，噬斑的数量随着噬菌体的增加呈线性增加。由于这个原因，在感染以前，要将噬菌体进行稀释，而不是将宿主细胞稀释。以低MOI（感染重复性）铺板，也可确保每一个噬斑仅包含一个DNA序列。【材料和试剂】（1）微波炉（2）LB/IPTG/Xgal培养板（3）LB培养基（4）顶层琼脂糖凝胶【操作步骤】（1）在5~10ml LB培养基中接种单个ER2537克隆， ...

以器官和组织为靶目标的噬菌体肽筛选 1．实验材料 (1)肽库：美国NewEnglandBiolabs的环状7肽库(Ph，D-C7CTm Phage Display Peptide LibraryKit)。 (2)人正常细胞株和人肿瘤细胞株。 (3)裸鼠。 2．实验器材和常用试剂 同蛋白质分子为筛选靶目标的实验方法。 3．实验方法 1)目标噬菌体 ...

请问伤寒沙门氏菌如何用噬菌体分型，这种噬菌体的试剂到哪购买？ 江西省卫生防疫站的何晓青自制了12株沙门氏菌噬菌体分型系；另外中国医学细菌保藏管理中心沙门氏菌分型噬菌体专业实验室也有。你可以跟他们联系一下。 具体做法请参考以下文献： 何晓青等，中华预防医学杂志，199428(3):136另外，河南省卫生防疫站底秀娟建立了一种伤寒沙门氏菌分型的新方法也提供给你，具体见附件．希望对你有帮助！ 一种伤寒沙 ...

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体，每天一批，我们做的是60T发酵罐。 噬菌体爆发迹象： 1、PH一直回升，会比较高（我们正常是7.00，回升到7.8）。 2、DO也很快回升，会上升到130%多。 3、发酵液变稀，OD值很快下降。 4、镜检看不到任何菌体。 5、爆发的时间一次比一次提前，都是发酵前期。 噬菌体爆发的速度很快，也就那么30分钟左右，当时我们刚刚移种也就那么 ...

各位好！我有几个关于PHAGE DISPLAY 问题想请教下你。请问一下Ph.D随机太库和M13 cDNA肽库两者的优缺点?？各在什么情况下选择较佳？还有NOVEGEN 的预制人组织的cDNA文库原理，在什么情况下使用?我打算研究与睾丸组织中相互作用的蛋白，是否用NOVEGEN的预制人睾丸cDNA文库?最后请问这些文库的代理商？噬菌体： M13KE ...

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等，并跟踪了目前该领域的最新研 ...

请教有关噬菌体分离扩增测滴度纯化等的相关问题，首先是如何从污水或标本中获取，可能这些问题比较傻，但是本人是新手，敬请指教，不要取笑！谢谢！ 下面这篇文章是讲如何从污水中分离噬菌体的，肯定会对你有帮助http://highered.mcgraw-hill.com/sites/dl/free/0072487445/92720/Exercise37.pdf 我们实验室的噬菌体扩增及测滴度方法： 第一 ...

碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 1 mM EDTA 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。 1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。 2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 ...

宿主不一样，你要分离的噬菌体方法步骤也不一样，下面摘录部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤，仅供参考： 1、噬菌体分离　 (1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。 (2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。 (3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。 (4)在1 号平板接 ...

pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法： 测定噬菌体滴度 只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时（即细胞过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序 ...

MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。 然 ...