DNA含量测定

相关专题 DNA连接与转化质粒大肠杆菌的基因工程 为了提高转化效率 实验中要考虑以下几个重要因素： 1. 细胞生长状态和密度: 不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的O ...

相关专题 DNA连接与转化质粒 一、 实验目的 学习外源DNA导入原核生物细胞的方法 二、 实验内容 热激处理将外源质粒DNA导入原核细胞。 三、 实验原理 利用CaCl2处理感受态体细胞，然后通过热休克处理，即置于42℃高温热激90秒，热休克后，需要使受体细胞在不含有抗生素的培养液中生长至少半小时以上，使其表达足够的蛋白，以便能在含有抗生素 ...

相关专题 DNA连接与转化质粒 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒DNA转化大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基因工程等研究领域的基本实验技术之一.现演示利用化学的方法(热击法)：使用化学试剂(如CaCl ...

相关专题 DNA连接与转化 实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒选用转化和筛选技术可获得含重组的阳性克隆.在此阳性克隆中DNA可在生物体系中大量扩增繁殖保存以及表达目的基因的产物这是PCR体外扩增DNA所不能替代的.配合DNA重组技术所获得的不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研医药生产和生物发酵等领域. 质粒转化不同 ...

相关专题 1、存放:超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80°C冰箱的底部.一定不要用液氮来存感受态细胞. 1)存放条件:超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感因此必须存放在–80°C冰箱的底部.即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失.采用BD Falcon 的14ml聚丙烯圆底试管:在转化实验中使用圆底 ...

相关专题 DNA连接与转化 4.1 实验原理 4.1.1 DNA的连接策略 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段( 外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种： (1)互补性粘性末端的连接 单一限制性内切酶或两种限制性内切酶(为同尾酶，如BamHI和BglII)分别处理载体和外源DNA，得到的粘性末端为互补性突出 ...

相关专题 DNA连接与转化 目的与原理 DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一D ...

相关专题 DNA连接与转化 前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。 1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如 ...

相关专题 当我们已经获得目的基因片段，选择好适当的克隆(或表达，转化)质粒载体， 并确定重组方案后，下面要进行的就是DNA片段之间的体外连接，从而获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表达(如现代基因工程药物的生产)，还可用于序列分析和转基因等重要生物技术的研究中。 DNA连接实验原理： DNA分子的体外 ...

相关专题 DNA连接与转化 目的与原理 转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。 二、材料和方法 1.材料：大肠杆菌 2.仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3.试剂 ...

相关专题 DNA连接与转化 第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段 然后体外使两者相连接 再用所得到重组质粒转化细菌即可完成。但在实际工作中 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自 ...

相关专题 DNA连接与转化 快速细胞破碎法实验步骤 1、挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8. 2、取1ml菌液至1.5ml eppendorf管中9000rpm离心9min去尽上清. 3、加入70μl Cracking Gel缓冲液20%SDS 10ml 250mmol/L ...

相关专题 DNA连接与转化 实验目的 了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义; 学习外源DNA转化入受体菌细胞并筛选转化子的方法。 实验原理 转化(transformation)是将异源DNA分子导入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃， CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。 转化混合物中的DN ...

相关专题 DNA连接与转化 一. 概念 1.transformation 特指以质粒DNA或以它作为载体构建的重组子导入细菌的过程。 2.transfection 指噬菌体、病毒或以它们作为载体构建的重组子导入细胞的过程。 3.感受态与致敏过程 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，用理化方法诱导细胞进入感受态的操作叫致敏过程。 二.转化 ...

相关专题 DNA连接与转化 1、DNA连接酶用量与DNA片段的性质有关，连接平齐末端，必须加大酶量，一般使用连接粘性末端酶量的10-100倍。 2、在连接带有粘性末端的DNA片段时，DNA浓度一般为2-10mg/ml，在连接平齐末端时，需加入DNA浓度至100-200mg/ml。 3、连接反应后，反应液在0℃储存数天，-80℃储存2个月，但 ...

相关专题 DNA连接与转化 重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。 1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中，37℃摇 床培养过夜。 2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13000rpm×3min 离心，弃上清，加入 ...

相关专题 DNA连接与转化大肠杆菌的基因工程 一、 实验目的 学习外源DNA导入原核生物细胞的方法 二、 实验内容 热激处理将外源质粒DNA导入原核细胞。 三、 实验原理 利用CaCl2处理感受态体细胞，然后通过热休克处理，即置于42℃高温热激90秒，热休克后，需要使受体细胞在不含有抗生素的培养液中生长至少半小时以上，使其表达足够的蛋白，以便 ...

相关专题 DNA连接与转化 1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条(小于0.6g)捣碎，置于1.5ml离心管中; 2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6)，振荡混匀; 3. -20℃放置5-10min; 4. 4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离心管中; 5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管 ...

相关专题 DNA连接与转化大肠杆菌的基因工程 连接: 目标片断回收后立即与pGEM-T载体做连接反应。反应体系：2X连接buffer 5μl，回收产物 3μl，T载体 1μl，T4连接酶 1μl，共10μl;混匀，4℃放置16小时以上 转化: 1、从-70℃冰箱中取40μl感受态细胞悬液冰上解冻。 2、 加 ...

相关专题 DNA连接与转化 “选择”(selection)和“筛选”(screening)的基本含义。 选择，是指通过某种外来附加压力(或因素)的辨别作用，呈现具有重组DNA分子的特定克隆类型的一种方法。选择所涉及的范围较为广泛，包括根据克隆载体提供的表型特征的简单选择(simple selection)，和根据突变的互补作用对克隆基因的直接 ...