DNA标记

This protocol was designed to generate directionally end-labeled probes for DNaseI footprinting but it can be used for any application that requires end-labeled DNA probes.Solutions10 mM dNTP StocksTh ...

Labeling oligonucleotides with 32P ATPSteve HahnLast modified 8/13/01Wear gloves throughout and work in radiation area. Monitor area before and after use.Mix the following in an eppendorf tube:1. 0.5 ...

NCBI的“electronic PCR（e-PCR）”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的DNA片段中的STS标记物。UniSTS (http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/ ) 能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链接的其他NCBI资源如Entrez、LocusLink 和MapViewer 也同样提供 ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印迹或称 ...

实验目的 1、掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法；2、了解制备原理及各种试剂的作用。实验原理 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染 ...

一、原理：在浓氯化钠（1―2mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化钠（0.14 mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。将抽提得的核蛋白用SDS（十二烷基硫酸钠）处理，DNA或（RNA）即与蛋白质分开，可用氯仿―异戊醇将蛋白质沉淀除去，而DN ...

真核细胞基因组提取 一. 实验目的及背景 高等动物，高等植物的基因组相当宠大， 如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有１．４×１０８个碱基对，水稻基因组有１．４×１０９个碱基对。真核细胞基因组中，约１万－１．５万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成 ...

一、目的 掌握植物基因组DNA提取的一般方法及注意事项。大分子量DNA分子的酶切分析。二、原理十六烷基三乙基溴化胺是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液 ...

Analys of Genomic DNA by Southern Hybridization (Southern Blot) Outline: Localization of particular sequences within genomic DNA is usually accomplished by the transfer techniques described by Souther ...

reagents: DNA for labeling (concentration c 150 ng/µl) modified nucleotides: Biotin-16-dUTP Digoxigenin-11-dUTP conc. 1nmol/µl (Boehringer Mannheim) dNTPs (regular nucleotides): dATP dCTP dGTP 0.5 mM ...

This protocol was designed to generate directionally end-labeled probes for DNaseI footprinting but it can be used for any application that requires end-labeled DNA probes.Solutions10 mM dNTP StocksTh ...

Wear gloves throughout and work in radiation area. Monitor area before and after use.Mix the following in an eppendorf tube:1. 0.5 microgram oligonucleotide dissolved in H2O.2. 3 microliters 10x kinas ...

In the hood:96 well dish with bacteriatitertechmicrotubesglass pipetteRemove colonies from each well using the titertech and place them into the coverPipette up and down to thoroughly mix the colonies ...

DNaseI FootprintintSolutions10X Binding Buffer200 mM Tris 8.0 200 m l 1M Tris pH 8.0500 mM NaCl 100 m l 5M NaCl10 mM EDTA 20 m l 0.5 M EDTA pH 8.0680 m l Qstore at room temperatureDNaseI Dilution Buff ...

An end labeled DNA probe is incubated with a purified DNA-binding factor or with a protein extract. The unprotected DNA is then digested with DNase I such that on average every DNA molecule is cut onc ...

一、 目的及要求。1、 了解质粒作为载体在基因工程中的作用2、 熟记提取质粒的基本原理，学习提取过程和方法3、 为下一步实验提供高纯度的DNA 样品二、原理：1、 质粒（Plasmid）：独立于染色体以外的双链、闭合、环状DNA，可自我复制。为基因工程中的常用载体（Vector）2、 作为载体的质粒需具备以下特点：1） 能自主复制。2） 具有多个限制性内切酶的单一酶切位点，又称为多克隆位点（mul ...

7.1实验原理 核酸分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。由于DNA一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链DNA分子解 ...

一、直接检出病毒核酸 　　1．核酸杂交（Nucleic acid hybridization） -临床病毒学中报速诊断方法通常是检测标本中的病毒抗原，然而核酸分子杂交具有高度敏感性和特异性，斑点杂交 (Dot hybridization) 广泛用于检测呼吸道标本，尿标本中的病毒核酸。标本滴加到硝酸纤维素膜上，病毒DNA结合到膜上，在原位进行硷变性处理后，有放射标记的已知病毒DNA片段杂并，两条单股 ...

实验前的准备工作：一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖） 1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇） 7、量筒：50ml、250ml、500m ...

一、目的： 了解并掌握地衣酚法测定RNA含量的基本原理和具体方法。 二、原理： RNA含量测定，除可用紫外吸收法及定磷法外，常用地衣酚法测定。其反应原理是：当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚orcinol）反应，在Fe 3+或Cu 2+催化下，生成鲜绿色复合物。反应产物在670nm处有最大吸收。RNA浓度在20―250μg・ml-1范围内 ...