抗体的纯化

一、原理 在酸性条件下( pH4.5)，非1gG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短链脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要为IgG，再用硫酸铵沉淀上清，即可获得纯度较高的IgG。辛酸/硫酸铵法比硫酸铵法能够获得更高纯度的IgG。 二、材料与方法 1、材料 （1）动物腹水 （2）辛酸(caprylic acid CA)，化学纯 （3）硫酸钱，分析纯 （4）SPA Sepharose 4FF亲 ...

应用硫酸铵盐析及DEAE-纤维素层析法提纯化的IgG，不仅操作复杂、需时较长，处理过程中样品体积大大增加，而且透析时变性严重，容易引起抗体效价降低等。为了克服这一不足，特别是当大量提取IgG时，则往往采取下列的简易办法。 一、DEAE-纤维素直接提取法 取样品直接过DEAE-纤维素柱。下面介绍的是最为简单的烧杯法。 1、以一定数量的DEAE52放入烧杯中，加入0.01Mol/L pH8.0PB缓冲 ...

以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。γ球蛋白（IgG）是血清免疫球蛋白的主要成分，约占全部免疫球蛋白的7 ...

从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。 一、原理 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。 二、试剂和器材 1、tsk deae spw离子交换层析柱 ...

一、原理 葡萄球菌a蛋白（SPA）具有与多种哺乳动物IgG分子fc段结合的能力，并与不同IgG亚类的结合力有所差别。改变pH及离子强度可洗脱结合于SPA-sepHarose cl-4b 柱上的IgG或不同的IgG亚类，可直接纯化血清或小鼠腹水中的IgG抗体。 二、试剂器材 1、spa-sepharose cl-4b （pharmacia-sigma） 2、磷酸缓冲液0.1mol/l pH8.6＋0 ...

一、原理 deae-sephadex a-50（二乙氨基—乙基-葡萄糖凝胶a-50）为弱碱性阳离子交换剂。用NaOH将Cl-型转变为OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白（等电点为pH6.85～7.5），其余均属酸性蛋白。pH7.2～7.4的环境中，酸性蛋白均被deae- sephadex a-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通过柱层析， ...

1、 血清加3倍体积的蒸馏水，调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下，加预冷的酒精（-20℃）到最终浓度为20%，保持在-5℃。产生的沉淀（a），含有大多数种类的免疫球蛋白。 2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1，产生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液内。 3 ...

精制抗体的方法很多。一般采用综合技术，避免蛋白变性。如分离IgG时，多结合使用盐析法与离子交换法，以求纯化。提取IgM的方法也很多，如应用凝胶过滤与制备电泳法，或离子交换与凝胶过滤等。 一、原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失 ...

免疫球蛋白（Immunoglobulin Ig）的含量代表着机体体液免疫的水平，并进一步代表着B细胞的功能，因此测定血清Ig含量可以推知机体的体液免疫功能和诊断某些疾病引起的Ig的过高和过低。 随着免疫学的发展和需要，免疫球蛋白的纯化和其成分的提纯成为必不可少的手段。纯化的方法很多，有单一法，但大多数采用二步法以上相结合的方法，特别是以硫酸铵提纯为基础，再经过层析柱的方法来提高免疫球蛋白及其各成分 ...

一、腹水型单抗的纯化 在单抗纯化之前，一般均需对腹水进行预处理，目的是为了进一步除去细胞及其残渣、小颗粒物质、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和过滤离心法，以前者处理效果为佳，而且操作简便。 1、二氧化硅吸附法 新鲜采集的腹水（或冻存的腹水），2000r/min 15分钟，除去细胞成分（或冻存过程中形成的固体物质）等；取上层清亮的腹水，等量加入PH7.2巴比妥缓冲盐水（VBS；0.004m ...

一、实验目的 1. 初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。 2. 了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。 二、实验原理 辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白，辛酸为短链脂肪酸，在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质；第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来，操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。 三、仪器、原料和试剂 仪器　　磁力 ...

抗体（antibody，Ab）是机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的终末B细胞--浆细胞合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链（H链），含450?550个氨基酸残基，相对分子质量在55000?70000之间；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链（L链），含210个氨基酸残基，相对分子质量约24000 ...

Immobilization of ligands on cuvette surfaces and measure the interactions of ligand which is immobilized on the cuvette and the ligate which is added to the immobilized cuvette. Immobilization of lig ...

在酶标记的溶液中，出现的是各种交联物的混合物，有酶-抗体、酶-抗体-酶、抗体-抗体、酶-酶，甚至还有游离的酶和抗体。 在这中间，除了抗体-酶和酶-抗体-酶外，其它都应该给予除去。 1.50%饱和硫酸铵沉淀法。 此法只能除去游离的酶及酶-酶聚合体。而不能除去其它不需要者。但是此法对酶标抗体的损耗少。&nb ...

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