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        抗体纯化:冷酒精沉淀法

        互联网

        6203

        1、 血清加3倍体积的蒸馏水,调节 pH至7.7(±)冷却到0℃。在激烈搅拌的条件下,加预冷的酒精(-20℃)到最终浓度为20%,保持在-5℃。产生的沉淀(a),含有大多数种类的免疫球蛋白。

        2、 沉淀a悬浮于25倍体积的0.15~20mol/l NaCl溶液(冷)中,加有0.05mol/l醋酸调节 pH到5.1,产生的沉淀(b),包括大部分的IgA和IgM,IgG留在上清液内。

        3、调节

        上清液的pH到7.4,加冷酒精(-20℃~-30℃)到最终浓度为25%,维持在-5℃。所得到的沉淀(c)含有90%~98% IgG。不同动物,IgG分离的条件和产量略有不同。见下表。

        4、从沉淀(b)可按下述方法进一步分离出IgA和IgM的混合物:将沉淀(b)悬浮在0℃ 水中,调节 pH到5.1,离心去除不溶的蛋白。调节 上清液离子强度到0.01~0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最终浓度为10%,保持在 –2℃或-3℃低温,所得的沉淀(b-b)主要含IgA和IgM。

        物 种

        pH

        沉淀条件

        IgG产量


        酒精浓度(%)


        离子强度

        5.1


        15.


        0.01


        65


        山羊


        5.2


        0


        0.01


        65


        家兔


        5.2


        10


        0.01


        70


        大鼠


        5.0


        15


        0.01


        50


        豚鼠


        5.1


        15


        0.01


        70

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