单克隆抗体技术

同种反应性Th和CTL克隆的制备 鼠T细胞克隆分为同种反应性T辅助细胞(Th)和细胞毒性T细胞(CTL)克隆，以及与可溶性蛋白抗原反应的Th1和Th2克隆。 同种反应性是指未免疫的鼠或人T细胞对同种异体细胞上组织相容性抗原的反应。尽管同种反应性T细胞克隆可从未免疫的脾细胞或淋巴细胞制备，但经同种抗原预刺激的细胞所获反应细胞的频率较高。细胞毒性和非细胞毒性T细胞可经有限稀释进行克隆 ...

阳性克隆的筛选(panning) 一个筛选实验包括数轮识别和复制过程。在每一轮中特异性结合的克隆被选择和扩增。这些克隆在大约3～5轮之后便可居于多数。每轮的富集系数约为102～103因此3轮之后一个特异结合克隆将富集106～109倍。 【材料和试剂】 （1）ELISA板 （2）湿盒 （3）0.1mol/L Na2CO3(pH8.6) （4）3％BSA （5）TBS ...

脾细胞1．材料(1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。(2) 1640培养液(3) 2.5％FCS－1640营养液2．操作方法(1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。(2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。(4) 用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入小试管中。(5 ...

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或 ...

目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠－大鼠，小鼠－人以及人－人杂交瘤技术。一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。免疫程序、剂 ...

骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。选择骨髓瘤细胞的条件：①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系，以便两者的组织相容性抗原一致；②骨髓瘤细胞必须是静息状态，不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外；③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度最好106个细胞/ml；④生长速度快，繁殖时间短。目前常 ...

要想制备比较好的单克隆抗体，动物的选择和抗原免疫程序、剂量和方法都是非常重要的。

创建重链改组噬菌体文库：配制50ul PCR反应混合液，包含：Vent聚合酶缓冲液，VentDNA聚合酶。

人VL基因文库的构建：器材和试剂：PCR试剂和设备，cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1），Gelleclean试剂盒。

创建轻链改组噬菌体文库：PCR试剂和设备，含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA。

平衡法选择高亲和力噬菌体抗体：器材和试剂:链霉亲和素磁珠,磁性1.5ml试管架。

杂交瘤细胞的制备

Fusion is an important procedure to produce monoclonal antibodies (MoAb). 一、PROTOCOL 1、prepare the culture of myeloma cells and maintain the concentration of the cells at the level of less than 10^6 c ...

【摘要】目的 探讨嵌合抗CD20抗体Fab’片段的抗肿瘤机制。方法 应用MTT法检测Fab’片段对Raji细胞生长的抑制作用，用Annexin V-FITC和PI测定Fab’片段对Raji细胞凋亡的诱导作用，用RT-PCR和Western blot检测Raji细胞中bcl-2表达的变化。结果 嵌合抗CD20Fab’片段对Raji细胞具有明显的抑制作用 ...

血管新生（angiogenesis）是一个受严格调控的多步骤过程，导致从已存在的脉管系统形成新的血管，对肿瘤的生长及转移，均是必需的。通过抑制新血管生成，中断肿瘤的营养供给，达到治疗目的，它代表了近年来一种治疗肿瘤及其它与病理性血管生成有关的人类疾病的新策略。 血管内皮生长因子（VEGF）作为内皮细胞特异性的促分裂原是其重要的正调节因子，其生物活性被两种高亲和力的酪氨酸激酶受体，即Flt-1（VE ...

【摘要】为了研究嵌合抗CD20基因工程抗体Fab的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制，本研究利用3H掺入法测定嵌合抗CD20 Fab对Raji细胞生长的影响，结果显示嵌合抗CD20 Fab对Raji细胞的生长具有抑制作用；利用流式细胞仪测定嵌合抗CD20 Fab诱导Raji细胞凋亡作用，结果显示嵌合抗CD20 Fab可诱导Raji细胞凋亡作用。这些实验结果证明嵌合抗CD20 Fab通过诱导Raji细胞凋亡的 ...

摘要：应用单克隆抗体技术抗肿瘤的导向治疗是恶性肿瘤的生物治疗方法之一。本文先介绍了单克隆抗体的特点和构型及研究现状，而后从非结合型单抗、单克隆抗体偶联物（包括化学免疫偶联物、放射免疫偶联物、免疫毒素、抗体导向酶－前体药物疗法）和其它（抗体－细胞因子融合蛋白、微型双特异性抗体）等几方面分别介绍了抗肿瘤导向治疗研究进展，并对未来提出了展望和指出了今后的研究方向。 自从1975年Kohler和Milst ...

本文已发表于中国肿瘤生物治疗杂志．2003，10（3）：221-222． 【摘要】表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor EGFR）是原癌基因ｃ-erb-B1的表达产物。其过表达和突变体均与肿瘤发生发展有密切关系，基于此优点成为目前肿瘤治疗的新靶点。本文就EGFR与肿瘤的关系及其单抗治疗肿瘤的进展作一综述。 【关键词】表皮生长因子受体（EG ...

一、抗体的定义和第一代单克隆抗体（经杂交瘤细胞生产） 抗体是在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一类糖蛋白。它是能与相应抗原特异的结合、产生各种免疫效应（生理效应）的球蛋白。国际卫生组织将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的一类蛋白统一命名为免疫球蛋白，它与抗体都是指同一类蛋白质。70000之间，称为“重链”（H链）。轻、重链之间和两重链之间由二硫桥连接，这样的四链结构 ...

一、免疫失败的可能原因及应采取的措施 有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。 1、免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。 2、抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。 3、制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并 ...