免疫组织化学实验

彩色免疫金银法（colouredIGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。

免疫组化Elivison二步法

SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。

4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜

欧美国家相继开展了免疫组化质量控制工作，建立了一套比较完善的质量控制方法和程序。

【求助】细胞免疫组化 参与者：sunnyBIO 没有做过，但是最近要尝试. 网上及园子里找过有许多种方法，但是不知道那种合适. 希望做过的各位可以给我指点. 在此希望高手可以提供详细的方法.不胜感激！ 参与者：sunnyBIO 米有人可以帮帮偶吗? 参与者：zhangyuelin1999 本实验室的方法，参考一下： 细胞爬片后， PBS洗3×5min 4%多聚甲醛固定30分钟（4度冰箱 ...

【求助】免疫组化 参与者：andywfa 我想请教一下，液氮冻存的组织，能否用来做免疫组化? 叩谢了！ 参与者：organer 当然可以，只要你冻存方法正确，冻存可以保护细胞，当然也可保护细胞表面抗原和组织抗原 参与者：zgxsea 液氮冻存组织一般用来提取蛋白、DNA或RNA，做相关指标的检测。如用其做免疫组化，存在一个技术性难题，即冻存的过程中，细胞内易形成冰晶，并破坏细胞结构，做了切片染色后 ...

对于初入实验室的学生，拟做冰冻切片的免疫荧光染色。从文献看来，荧光素标记的二抗大部分都是选择Jackson ImmunoResearch公司产品，偶遂登入其官方网站，其产品种类太多了，令人眼花。如何选择以下哪种类别参与自己的实验？ 例如：Jackson ImmunoResearch All Secondary Antibodies：Whole IgG of Affinity-Purified An ...

1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。 免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫酶组 ...

一、组织处理 恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所需的抗原，反而往往由于组织的坏死或制片时的刀痕挤压，在上述区域易出现假阳性结果。 1、组织及时取材和固定 ...

一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究 ...

二、缓冲液 免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。 1、0.2 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer，PB） 试剂： NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O。 配制方法：配制时，常先配制0.2 mol/L的NaH2PO4和0.2 mol/L ...

如何获取与组织细胞功能相关的各种定量测量信息是免疫组织（细胞）化学的一大难题。制作免疫组织（细胞）化学标本环节较多，只要有一个环节失误就会影响实验结果，除了需要精制的药品外，还需要熟练的技术。那么，做成理想的标本后，如何进行观察才能获得尽量多的的各种定量信息，而且使这些信息能较客观的反映出来，这就是本文的写作目的。 一、定量分析的重要性 目前有许多研究免疫组织（细胞）化学的文章，是做定性和定位研 ...

5、研究神经递质的超微结构定位 应用免疫电子显微镜技术（常用为PAP法或胶体金标记技术）可显示抗原在神经细胞内的超微结构定位及在突触水平神经元间的联系的化学本质。Pickel应用免疫电镜观察证明TH存在于DA和DA能神经元的细胞体、树突和近侧轴突。在胞体内此酶定位于内质网、Golgi器和微管上。神经终末枝的突触小泡一般认为是神经递质的亚细胞贮存部位，在电镜下观察神经末梢内突触小泡呈现不同形态，目前 ...

免疫细胞化学的发展对许多领域的研究起到很大的推动作用，在神经科学的研究中尤为突出。本文仅就免疫细胞化学在神经科学的基础研究方面的应用做一简单介绍。 一、确定神经递质的性质、定性和分布 早期的神经科学工作者应用传统的神经解剖学研究方法如甲基蓝染色法、镀银染色法等对中枢及外周神经系统的结构做了大量的研究工作，但由于技术方法的限制，对神经递质的性质无法确定。1949年Koelle建立了胆碱酯酶染色法（ ...

抗原修复主要用于福尔马林或多聚甲醛固定的石蜡包埋组织切片。 1、抗原热修复 （1）高压热修复 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01 M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗 ...

免疫细胞化学技术在继续改进和完善中，新的技术方法不断出现。除目前国内已开始应用的免疫金技术和免疫金银技术外，80年代，新的免疫细胞化学技术还有半抗原交联抗体法和令人瞩目的分子杂交免疫细胞化学技术。免疫金银技术和分子杂交免疫细胞化学技术将分别以专章叙述，本节仅就半抗原交联抗体法作一简要介绍。 【半抗原交联抗体法（Hapten –Coupled techniques）】 近年来，为提高敏 ...

如何获取与组织细胞功能相关的各种定量测量信息是免疫组织（细胞）化学的一大难题。制作免疫组织（细胞）化学标本环节较多，只要有一个环节失误就会影响实验结果，除了需要精制的药品外，还需要熟练的技术。那么，做成理想的标本后，如何进行观察才能获得尽量多的的各种定量信息，而且使这些信息能较客观的反映出来，这就是本文的写作目的。 一、定量分析的重要性 目前有许多研究免疫组织（细胞）化学的文章，是做定性和定位研 ...

一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究 ...

1、洗载玻片 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了是载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整，便于组织吸附，然后置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4（大约冲一个小时左右），再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上，置于37 oC温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。 2、包埋组织 先 ...