免疫组织化学实验

实用免疫细胞与核酸分子杂交技术前　言第一章　总论第一节　有关的免疫学理论一、抗原、抗体的概念及抗原抗体的关系（一）抗原（二）抗体（三）抗原与抗体的关系二、抗原的性质及种类（一）抗原的性质（二）抗原的种类三、抗体的性质和种类（一）抗体的一般性质（二）抗原性和分类特征（三）抗体的种类（四）抗原与抗体的反应四、抗体形成的机理（一）免疫反应的形成（二）影响抗体产生的因素五、补体的系统第二节　免疫细胞化学的有关技术概述一、抗体的制备和配制（一）抗体的制备 ...

原位杂交组织化学概述　　一、核酸分子杂交技术　　1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动合成仪的诞生，大大丰富了核酸探针的来源，新的核酸分子杂交类型和方法不断涌现。按其作用方式可大致分为 ...

（共享） 高免血清制备的方案！！（共享） 免疫组化操作流程(共享) 实验室分子生物学免疫学等常用试剂配方(共享）92-99四军大免疫博士入学试题汇总！(共享)anti-CXCR1, anti-CXCR2, anti-CCR7 小鼠抗人单克隆抗体剩余（共享）DNA疫苗技术(共享）Eight Immunology flashs（共享）ELISA处理软件（1）(共享）elisa的通用规则(共享)Elisa分析软件（共享）ELISA数据处理软件（2）（共享）ELISA数据 ...

免疫组化问题及解决办法1、染色过强原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体），抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因 解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含 ...

二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisionTM/HRP） ...

一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一 ...

ELISA讨论区：【请教】关于测小分子抗原时c18柱纯化 【请教】一个辅助噬菌体Ｍ１３－ＫＯ７的问题【求助】如何降低Elisa检测中的交叉反应【求助】武汉意德生物公司elisa试剂盒如何【求助】ELISA试剂盒询问【请教】在直条图中如何作出P/N值的曲线图【求助】竞争ELISA抗原保护剂的选择其他试验讨论区：【请教】关于autologous MLR中，一个问题【请教】关节局部温度 【请教】关于噬菌体肽库试剂盒 【求助】哪里能做低温包埋 【请 ...

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有阳性信号）。一、 无色 ...

（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L N ...

免疫组化常见问题的处理免疫组化常见问题的处理当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配； ...

免疫组织化学的概念：免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验所用的抗体有哪些？免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动 ...

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6m。 2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。 3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。 4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。 5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。5. PPS洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要 ...

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮 ...

看过不少此类文章,做免疫组化过程中遇到困难看看这篇文章,也许很有帮助!影响免疫组化的因素及对策（一）免疫组化染色假阳性及其对策1 、消除内源酶的影响 在涉及免疫过氧化酶的各种染色中，均用过氧化物酶来标记抗体，酶的作用是催化底物，使显色剂显色，正常组织中也含有一定量的过氧化物酶，其同样也能催化底物显色，而影响免疫组化染色的特异性，因此在加入标记酶前应设法将其灭活，以保证染色反应的特异性。通常情况下，去除内源酶的方法是先用 3% ...

一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片（特别是淋巴造血组织，淋巴细胞，单核细胞，组织细胞表面多），主要是和二抗反应，因为一抗一般稀释度均较大，因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体，所以石蜡切片不多见。 ...

免疫组化网络资源集锦!!自己选看啊!8D1.Immunohistochemistry Resource Group - Information and support for the field of immunohistochemistry. Images, resources, group reports, online database, applied IHC and molecular morphology, IHC references, and employment information.-- http:/ ...

1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES，置 ...

免疫组化常见问题的处理当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗 ...

本人刚开始做实验，杳看了一些资料，准备用以下两种方法中一种进行实验，请大家指教，看看具体条件行不行，有什么要改进的地方，谢谢！！！方法一：1、白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上，烤片60度1h（此载玻片未经粘片剂处理）2、二甲苯5min *33、异丙醇5min *34、乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min5、双蒸水洗3miundefined36、丙酮洗3 次7、APES胶立式染缸1-3min8、丙酮洗9、双蒸水冲3次10、PBS洗5min1 ...

蓝色 {color: #00F;}接上一期 师兄精选：免疫组化菜鸟攻略（一），本期我们再聊聊免疫组化（我比较随性，想到哪写到哪）首先，先介绍下免疫组化一般操作流程：1. 石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(PH7.4)冲洗三次，每次5分钟。2. 根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。修复方式：我采用压力锅进行抗原修复，取一定量的修复液于压力锅中，加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖 上锅盖 ...