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        (请教)肝组织的VEGF免疫组化方法

        丁香园论坛

        5254

        本人刚开始做实验,杳看了一些资料,准备用以下两种方法中一种进行实验,请大家指教,看看具体条件行不行,有什么要改进的地方,谢谢!!!

        方法一:

        1、 白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上,烤片60度1h(此载玻片未经粘片剂处理)

        2、 二甲苯5min *3

        3、 异丙醇5min *3

        4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3mi

        5、 双蒸水洗3miundefined3

        6、 丙酮洗3 次

        7、 APES胶立式染缸1-3min

        8、 丙酮洗

        9、 双蒸水冲3次

        10、 PBS洗5min

        11、 3%双氧水10-15min

        12、 PBS洗5min

        13、 抗原修复(微波加热法)

        14、 PBS冲5miundefined3次

        15、 非免疫性动物血清50ul封闭

        16、 甩去血清,加入50ul一抗,室温下60mi

        17、 PBS冲洗5miundefined3次

        18、 加入50ul二抗,室温下20min

        19、 PBS冲5miundefined3次

        20、 ABC复合物50ul,室温下20-30min

        21、 PBS冲5miundefined3次

        22、 DAB显色液3-10min

        23、 双蒸水洗1miundefined2次

        24、 苏木素复染0.5-1mi

        25、 自来水洗30min

        26、 封片

        方法二:

        1、 白片放于处理好的载玻片上,烤片60度5d (此载玻片经粘片剂APES处理)

        2、 二甲苯5min *3

        3、 异丙醇5min *3

        4、 乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min

        5、 双蒸水洗3miundefined3

        6、 双氧水10-15min

        7、 PBS洗5min

        8、 抗原修复(微波加热法)

        9、 PBS冲5miundefined3次

        10、 非免疫性动物血清50ul封闭

        11、 甩去血清,加入50ul一抗,室温下60min

        12、 PBS冲洗5miundefined3次

        13、 加入50ul二抗,室温下20min

        14、 PBS冲5miundefined3次

        15、 ABC复合物50ul,室温下20-30min

        16、 PBS冲5miundefined3次

        17、 DAB显色液3-10min

        18、 双蒸水洗1miundefined2次

        19、 苏木素复染0.5-1min

        20、 自来水洗30min

        21、 封片

        抗原修复用微波加热法:

        1、0.01M柠檬酸—柠檬酸盐缓冲液放入微波炉内加热至沸腾

        2、脱蜡水化后组织置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,再中档继续处理15min

        3、取出波炉盒,室温放置20min

        4、取出切片架,用PBS冲洗3次,后滴加50ul非免疫性动物血清

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