化学生物学实验技术

相关专题 一、原理：氨基酸混合液经纸上层析，由于不同的氨基酸有不同的分配系数，移动速率不同，从而达到分离。经显色后，与标准氨基酸图谱比较或与氨基酸的标准Rf值比较，可辨别各种氨基酸。二、材料与试剂1、酸向展开剂：正丁醇：88%甲酸：水=15：3：2，量取正丁醇150ml，88%甲酸30ml，蒸馏水20ml，置入分液漏斗中充分振荡。此液需新配制 ...

相关专题 一、原理：味精在2M盐酸溶液中以谷氨酸形式存在。此时，纯谷氨酸的比旋光度为20。在一定温度下测定样品的旋光度，与该温度下纯L－谷氨酸的比旋光度比较，可计算出味精的纯度。二、材料与试剂分析纯盐酸、味精样品、旋光仪、容量瓶三、操作方法1、样品溶液配制：精确称取味精样品10.00g，加40－50ml蒸馏水溶解。搅拌下加入分析纯盐酸16ml ...

相关专题 一、原理：酵母细胞的呼吸作用要消耗氧气，可用华勃氏呼吸仪测定其好氧量。由于在好氧的同时放出二氧化碳，需用氢氧化钾加以吸收。 二、材料与试剂 酵母悬浮液：每毫升含1×108-10×108个细胞、3%葡萄糖溶液、0.02M磷酸二氢钾溶液、20%氢氧化钾、华勃氏呼吸仪 三、操作方法 1、取已知体积(预先经水银重量法测定)的反应瓶。在反应 ...

相关专题 一、实验目的 学习用阳离子交换树脂柱分离氨基酸的操作方法和基本原理。 二、实验原理 离子交换层析(ion exchange chromatography，简称ICE)是分析和制备样品混合物的液-固相层析方法，是基于待测物质的阳离子或阴离子和相对应的离子交换剂间的静电结合，即根据物质的酸碱性、极性等差异，通过离子间的吸附和脱吸附原理 ...

相关专题 一、实验目的1. 学习从组织细胞中制备酶的方法。2. 掌握多酚氧化酶的作用及各种因素对其作用的影响。二、实验原理多酚氧化酶是一种含铜的酶，其最适pH值为6～7。由多酚氧化酶催化的反应，如以邻苯二酚为底物，可以被氧化形成邻苯二醌。由多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果 ...

相关专题 一、实验目的①学习和掌握从植物组织中分离核酸的原理和操作方法。②学习和掌握测定核酸含量的定糖法(苔黑酚法和二苯胺法)的原理及操作方法。二、实验原理核酸是生物体内的主要化学成分，核酸在生物体内主要以核蛋白的形式存在。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。DNA主要存在与在细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。用冰冷的稀三氯 ...

相关专题 “分子机器”是多种特殊蛋白质组成的复合体，这些蛋白质能共同协作执行某个生物功能。大部分活细胞要发挥功能，必须通过“分子机器”来实现。长期以来，进化的脚步如何一点点地造就出这些复杂的结构还是个谜。 最近，美国芝加哥大学和俄勒冈大学科学家利用生化技术复活了一些古老的基因，在现代生物体上测试了它们的功能，并得出了令人惊讶的结论：分子机器 ...

相关专题 一.玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 1. 玻璃仪器的洗涤 (1)新购买的玻璃仪器 首先用自来水洗去表面灰垢 然后用洗衣粉刷洗 自来水冲净后 浸泡在 1%~2% 盐酸溶液中过夜以除去玻璃表面的碱性物质。最后 用自来水冲洗干净 并用蒸馏水冲洗 2 次。 (2)对于使用过的玻璃仪器 应先用自来水冲洗 再用毛刷蘸取洗衣粉刷洗。用自来水充 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶基因工程让一切皆有可能 基因工程操作中涉及一系列相互关联的酶促反应。已经知道有许多重要的核酸酶，如限制性内切核酸酶、外切核酸酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、反转录酶、DNA及RNA的修饰酶等，在基因工程的操作中有着广泛的用途。 1.限制性内切核酸酶 限制性内切核酸酶(restrictionendonuclease ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 什么是VentR、VentR(exo-)、 Deep VentR和 Deep VentR(exo-) DNA聚合酶? NEB公司研发的VentR和Deep VentR DNA聚合酶都是克隆于海底高温喷泉的微生物，其耐热性能和保真性能远高于Taq DNA聚合酶。VentR的半衰期在100°C时是1.8小时，是Ta ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的. (一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 大肠杆菌DNA聚合酶(E.coli DNA polymerase)主要有3种作用：①5’→3’的聚合作用。但不是复制染色体而是修补DNA，填补DNA上的空隙或是切除RNA引物后留下的空隙。②3’→5’的外切酶活性。消除在聚合作用中掺入的错误核苷酸。③5’→3’外切酶活性。切除受损伤 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 核糖核酸聚合酶(RNA polymerase) 催化RNA合成的酶。主要指DNA指导的RNA聚合酶，即以DNA为模板，以4种核苷三磷酸(ATP，GTP，CTP和UTP)为底物，从5′到3′合成RNA的酶。其催化方式与DNA聚合酶相似，但不具备有校正作用的外切核酸酶活性，聚合反应也不需引物 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 端粒是真核细胞染色体末端的一个特殊结构，由一段具有特定重复序列的DNA和端粒结合蛋白组成，是维持染色体结构稳定的重要因素。端粒DNA的复制不是由DNA聚合酶完成的，而是由端粒酶(telomerase)催化合成后添加到染色体的末端。正常细胞随着细胞分裂活动的进行，端粒DNA逐渐缩短，当缩短到一定程度时，染色体结构 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 DNA聚合酶1: 1.能催化单个脱氧核糖核苷酸连接到DNA链的3'端. 2.能沿5'端到3'端方向外切DNA(切除引物) 3.能沿3'端到5'端方向外切DNA(纠错或者说DNA损伤的恢复) DNA聚合酶2: 1.发挥作用需要镁离子和铵根离子存在 2.同样能参与DNA聚合酶 ...

相关专题 RNA酶A是内切核糖核酸酶，可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3"端，切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3"磷酸及末端带嘧啶3"磷酸的寡核苷酸(Davidson 1972)。无辅因子及二价阳离子存在时，RNA酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al.1977)或氧钒—核糖核苷复合物(Puskas ...

相关专题 RNA酶T1为一内切核糖核酸酶。它特异地作用于鸟嘌呤核苷酸3"端磷酸并切割与相邻核苷酸相连的磷酸二酯键。反应的终产物为鸟嘌呤核苷3"磷酸及末端带鸟嘌呤核苷3"磷酸的寡核苷酸(Davidson 1972)。 用途 去除DNA-RNA杂交体中未杂交的RNA区。 ...

相关专题 锌指核糖核酸酶(ZFN) 由一个 DNA 识别域和一个非特异性核酸内切酶构成。DNA 识别域是由一系列 Cys2-His2锌指蛋白(zinc-fingers)串联组成(一般 3~4 个)，每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。锌指蛋白源自转录调控因子家族(transcription factor family)，在真核生物中 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 修饰酶是能催化稀有碱基参入RNA或DNA，或对原有碱基进行修饰的酶。以防止限制性内切酶的破坏。 体内有些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，而使其在高活性形式和相对较低的活性形式之间互相转变，这种调节称为共价修饰调节(covalent modification regulation)，这类酶称为修饰酶 ...