核糖核酸酶A(RNase A)

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RNA酶A是内切核糖核酸酶 ，可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3"端，切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3"磷酸及末端带嘧啶3"磷酸的寡核苷酸(Davidson 1972)。无辅因子及二价阳离子存在时，RNA酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al.1977)或氧钒—核糖核苷复合物(Puskas et al.1982)所抑制。

用途

(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除未杂合的RNA区。

(2)确定DNA或RNA中单碱基突变的位置(Myers et al.1985，Winter et al.1985)。 在此方法中，RNA-DNA或RNA-RNA杂合体上的单碱基错配可被RNA酶A识别并切割。利用含SP5或T7噬菌体启动子的质粒，在体外合成与野生型DNA或RNA互补的32p标记RNA探针，然后与待检含单碱基置换的DNA或RNA退火， 所产生的单碱基错配可用RNA酶A切割，通过凝胶电泳 分析切割产物的大小即可确定错配的位置。在所有各种可能的单碱基错配中，大约50%可用此法确定。

制备不含DNA酶的核糖核酸酶

将胰核糖核酸酶 (RNaseA)溶解在0.01 moI/L醋酸钠(pH5.2)中，使终浓度为10 mg/m[，加热到100oC，15min，在室温下缓慢冷却。用0.1体积的1M的Tris-C1调整pH至7.4后，分装小管保存在—20C备用。当浓缩的溶液在中性pH条件下加热到100C时，核糖核酸酶产生沉淀。