华勃氏呼吸仪的使用（酵母细胞好氧量的测定)

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一、原理：酵母细胞的呼吸作用要消耗氧气，可用华勃氏呼吸仪测定其好氧量。由于在好氧的同时放出二氧化碳，需用氢氧化钾加以吸收。

二、材料与试剂

酵母悬浮液：每毫升含1×108-10×108个细胞、3%葡萄糖溶液、0.02M磷酸二氢钾溶液、20%氢氧化钾、华勃氏呼吸仪

三、操作方法

1、取已知体积(预先经水银重量法测定)的反应瓶。在反应瓶中心的小杯加20%氢氧化钾溶液0.2ml，在反应瓶中加入0.02M磷酸二氢钾1ml，3%葡萄糖液1ml和酵母细胞悬浮液1ml。同时取一反应瓶作为温度计，瓶中加入3.2ml蒸馏水。并检查系统保证不漏气。

2、把反应瓶装置好，于28℃温度振荡15min，以达温度平衡(平衡过程，开三通活塞，与大气相通)。

3、关闭活塞，将检压计密闭端的液柱调节到参比点，记录开口端液柱高度。继续振荡，每隔10min读数一次，记录60min内液柱高度的变化。

四、计算

根据反应瓶总体积V，反应瓶内液体体积Vf(3.2ml),反应温度t(28℃)，28℃时氧气的溶解度ao2(0.027mlO2/ml),P0(10000mm),计算反应瓶常数：

K=

再根据液柱高度变化，计算60min氧气消耗的体积，再根据酵母细胞悬浮液的浓度(细胞数/毫升数)计算出每个细胞每小时的平均好氧量。