氨基酸生化实验技术

xMagTM磁性微粒表面分别含有氨基、羧基等功能基团，利用戊二醛或1-乙基-3碳二亚胺（EDC）等偶联试剂，将蛋白质、抗体和核酸等生物分子共价结合在其表面，可应用于蛋白纯化、免疫学检测、核酸纯化和核酸杂交检测等领域。 产品特点 偶联稳定：共价偶联保证在苛刻条件下生物分子仍可稳定固定于磁粒表面。 高效偶联：相比同类产品具有更多的活性基团，有效提高生物分子的利用率。 操作简单：借助磁性 ...

筛选多肽的操作步骤第一天以0.1M NaHCO3（pH 8.6）制备100mg/ml的靶分子溶液。如果需要稳定靶分子，可以用含有金属离子的相似离子强度缓冲液。在每孔内加入1.5ml靶分子溶液，重复涡旋直至表面完全湿润（这一步要多注意，尽量避免溶液形成液珠）。在湿盒中，4℃温和振荡孵育过夜。4℃保存于湿盒中备用。第二天将ER2537（滴度测定时用来铺板的细菌培养物）接种至10ml LB培养基中。如 ...

环已烯的分子结构含有双键，与单键相比，双键较为活泼，打开后即可直接生成已二酸，其关键是催化体系的研究和开发，生物法将成为已二酸合成技术发展趋势。

本文介绍了氨基转移反应的定性鉴定的内容。

离心技术是根据颗粒在匀迷圆周运动时受到一个外向的离心力的行为发展起来的一种分离分析技术。 1、用于工业生产的，如化工、制药、食品等工业大型制备用的离心技术，转速都在每分钟5000转以下。 2、用于生物、医学、化学等实验室分析研究的，转速从每分钟几千到几万转以上，此类技术的使用目的在于分离和纯化样品，以及对纯化样品的有关性能进行研究。 基本原理 1、离心力Centrifugal force ( ...

问：看了园子里很多帖，有关氨基酸是否可以做成羧基上的酰氯，有人说fmoc保护的还可以，但是手头就只有boc保护的，于是想了下合成方案，望高手指点，就是在低温下（可能冰水中）boc-氨基酸：socl2=1：1（2：1）条件下，用甲苯作溶剂，三乙胺做傅酸剂缓慢滴加来促使boc-氨基酸做成酰氯，希望大家提提意见，是否可行？谢谢。 答：请注意，EDC/DCC等不是催化剂，要加化学计量的，不知道&ldquo ...

问：第一次做氨基酸的DNFB衍生，40ul的样品加入100 ul 0.5M pH9的Na2CO3，然后加入60ul的DNFB使终浓度为30％，但加入DNFB后出现了沉淀，请问怎么回事？是不是因为pH的原因？ 答：建议改NaHCO3DNFB该为10%。 答：国内都用的是NaHCO3，我参考的是外文文献，那几篇文章都出自同一个实验室，杂志的影响因子很高，他们使用的是Na2CO3，DNFB的用量也参考 ...

问：有个氨基酸品种很难冻干，请教一下有经验的战友，慢冻的话怎么冻法？ 答：如果你的处方溶点很低的话可以尝试预冻时间长一些，温度也尽量低一些。另外升华干燥温度升的慢一些也有利于冻干，这些我做的经验，另外楼上说的反复冻融也有帮助，你自己分析一下原因，相信会有好的结果。 答：设计好冻干曲线，采用梯度升温，反复预冻，反复升华干燥的办法设计冻干曲线。在这之前要测准最低共熔点！ ...

问：易溶于80醇，能溶于热水，但容易破坏，难溶于冷水。大孔树脂101不吸附，在油脂中该如何分离？ 答：可以参照青霉素的方法。首先看一下你的是什么性质的氨基酸如果是酸性的可以碱化，这样就很容易溶于冷水了，就可以先用醇萃取后碱化，溶于水，你说呢？ 答：是碱性氨基酸是否考虑将其转化为盐酸盐，静置分离后再用调pH的方法将其转化为中性，这时可以浓缩结晶。如果含盐太多着考虑用离子交换层析。不过一般浓缩结晶法 ...

问：氨基酸分D型和L型，请问一下，微生物中能够利用的氨基酸，有否分型的呢？是两种类型都能利用，还是只能利用其中一种型呢？是否不同的微生物利用的氨基酸类型又不一样呢？ 答：一般说来绝大多数都是利用L型的氨基酸，因为生物体中D型氨基酸很少，而且也只能被其相应的酶作用。但D型氨基酸的利用还是存在的。如参与细菌细胞壁的肽聚糖中发现D-谷氨酸和D-丙氨酸；在一种抗生素短杆菌肽中发现D-苯丙氨酸。D型氨基酸 ...

问：我的实验中需要使用HPLC做多种氨基酸溶液的定量分析，请问在使用氨基酸柱时，是不是只要直接进样就好了，不需要另外对氨基酸进行衍生化？ 再请教一个问题，在选择氨基酸柱时一般选用哪种型号较好，我主要测8种必需氨基酸，氨基酸柱和HPLC的型号要搭配吗？我是超级新手，请知道的朋友帮一下忙，万分感谢！ 答：分析氨基酸必须衍生化，因为绝大部分氨基酸无紫外吸收，只有少数几个含苯环的氨基酸才有明显的吸收，也 ...

问：最近做氨基酸含量得测定，我买的标准品是sigma得，是粉剂，怎么溶解，请大家帮帮忙啊？谢谢！ 答：日立氨基酸分析仪，标样本身是溶液，用0.02NHCL稀释即可。 答：溶解方法很多吧，用HPLC测，有用甲醇溶的，有用双蒸水溶的，有用流动相溶的，看自己怎么测吧。但是水溶会很慢。尤其是谷氨酸，谷氨酸盐就不是了。 ...

问：新购的非必需氨基酸sigma，瓶子上注明为100×，文献上说需要添加量为1%。这里的1%如果换算为原液的量是不是就变成万分之一。另外有些文献上说0.01mM/L又是多少呢，怎么换算？ 答：是应该就是这个意思（１００ml培养液添加１ml），刚才是我理解错了。至于0.01mM/L，这个数字出现在另外一个文献上。也许１００ml培养液添加１ml非必需氨基酸后，非必需氨基酸的浓度就刚好是0. ...

问：1. Name: Boc-Glu(OBzl)-OH 2 Name: Boc-Glu(OcHex)-OH 3 Name: Boc-Glu(Ofm)-OH 请问各位大侠：上述保护氨基酸脱去羧基保护基但又不影响氨基保护基的反应条件。详细结构请看附件，谢谢！ 答：都是很常规的脱保护反应Boc对大部分质子酸路易斯酸敏感，所以要选择非酸性条件： 1、Pd－C/H2rt. Ref:.Org. ...

问：我最近用红系裂解物翻译系统表达一种32个氨基酸的短肽，因为实验条件有限，不能用35S标记的蛋氨酸进行合成，所以不能用放射自显影进行检测，我想问问能否用蛋白电泳的方法检测，我查文献看到有一种tricine gradient gel，不知道可不可以检测这种短肽？有没有人知道这种胶的配方？参考这个文献吧。 答：我分析小于10kd 的肽，就是参考的这一个。效果吗，很好呀！ 答：体外翻译系 ...

问：在高等生物中，尤其是人体内，所含有的蛋白质均由L－型氨基酸构成，但是，据研究表明，随着人体的衰老，机体内一些氨基酸会自发转变为D－型。这种立体议购现象的出现是否是机体开始衰老的一个标志，能否通过降低异构化过程来推迟机体衰老？欢迎大家讨论。 答：有意思，很有可能构型的确蕴涵着丰富的生物学信息。但这个过程能用什么方法才能控制呢？很有意思的命题！ 问：怎样识别和分离体内旋光性不同的氨基酸呢？目前来看 ...

问：哪位做过不进行衍生化反应直接测定氨基酸的试验，最好是反相色谱测定非芳香族氨基酸？ 答：可以作到用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01mol/L磷酸水溶液（pH=2.5）为流动相B，采用梯度洗脱，在25分钟内流动相A由35%增加到70%，并在27分钟时降为35%的A，用35% A平衡6分钟，检测波长为210nm，你可以试一下！ ...

问：小弟最近用20%盐酸水解某酯类中间体得到如下氨基酸，反应完后用NaOH中和至等电点附近，看到有些灰白色沉淀析出，静置过滤后，滤纸上却只留下了深褐色泥状固体，特别像巧克力化了那种样子，滤液还是呈红棕色，而且这东西(滤饼)在有机溶剂中几乎都不溶，很难重结晶，又来了一次酸溶碱沉还是这样的东西，请问高人如何将这种氨基酸提取出来并纯化？（注：我用滤饼和滤液分别点板，滤饼有三个点，说明肯定有杂质，而滤液反 ...

问：我实验中需要确定多肽（8肽）中的某个氨基酸的作用，把该氨基酸用其它氨基酸置换。请教“进行氨基酸置换”时有什么要求？如何选择哪个氨基酸可用来做置换前者？选择时有什么原则或方法？ 答：1. 一般地，在蛋白中研究某部分（domain）氨基酸的重要性，通常采取Ala scanning的办法。因为Ala的侧链最简单，如果发生了什么效应可以减少一些其它因素的可能。 但这种情况，基 ...

问：最近在做酵母双杂交，有些营养缺陷培养基要单独加氨基酸，不知道这些氨基酸配成母液以后能不能高温高压灭菌啊？请各位高手指教，谢谢！ 答：一般来说，在配制培养基过程中，在高温高压过程中易配破坏的成分如葡萄糖，氨基酸，抗生素等，多采用0.22um的滤膜过滤除菌。所以，建议楼主最好，过滤除菌后单独加入。 问：基酸不能高压灭菌吗?？可是在测定蛋白质中氨基酸含量的时候，酸解的条件可是110℃浓盐酸的条件下 ...