酶学实验技术

引言：果汁中富含多种成份，酶法分析对于这些成份的最终确定是一种非常有用的工具。爱尔兰Megazyme酶法分析试剂盒为一种特异性、可多次检测的试剂盒，可用于定量分析。应用此种试剂盒的优势在于一方面是它的省时性，另一方面是它的实验操作的高度安安全性。多数的酶学分析方法被IFU(国际果汁生产者联合会)、AIJN(果汁及饮料生产者联盟)及其他标准组织广为推崇，确定为标准检测方法。实验在分光光度计下操作即可。 果汁分析中的几点 ...

降血脂药他汀类无论是之前成熟的发酵品种，还是当下发展迅速的全合成产品，一直是处于不断革新和改进的状态，特别是新的酶法工艺的发展，引领着市场的走势。从整体环境看，我国的环保、安全成本将继续逐步加大，人力成本持续上涨，这些必然的趋势所带来的，是所谓的“中国制造”优势的部分散失。目前全球包括美国在内，都在流行“制造业回归”，虽然和化学原料这种环境污染压力较大的品种情况会不一样，但印度开始大量输出洛伐他汀的情况，无疑是这样 ...

1. 前言了解活体的骨代谢状态是研究相关细胞生理活性的一个有效方法。对骨组织进行碱性磷酸酶（ALP）染色后可以了解成骨细胞的骨形成情况，对骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色可以了解破骨细胞的骨吸收情况。若在同一切片上进行双重染色就能同时了解两者的情况。另外，它有一个优点是在脱钙标本里，只要可以双重染色，无需专用的设备，仅用一般的设备就可以方便地观察到骨代谢。在此前提下，我们需 ...

2011年5月，国际学术刊物Hepatology刊登了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所丁小燕实验室的研究成果。该研究发现索拉菲尼（sorafenib）改善肝纤维化的新机制。 中国是“肝病大国”，肝纤维化作为多种慢性肝病病理发生过程的重要特征，一直是肝病研究和治疗领域所关注的重要课题之一。肝纤维化成因复杂，TGF-b是目前已知最重要的促肝纤维化因子。肝实质细胞在受到损伤 ...

酶的载体结合法、交联法和包埋法等固定化方法 酶的固定化方法不下百种，归纳起来大致可以分为三类，即载体结合法、交联法和包埋法。(一)载体结合法 载体结合法是指将酶固定到非水溶性载体上的方法。根据固定方式的不同，这种方法又可以分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法。物理吸附法是指将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性炭和多孔玻璃等。离子结合法是指通过离子键将酶结合到具有离子 ...

酶的生产提取法、发酵法和化学合成法 酶的生产是指经过预先设计，并且通过人工控制而获得所需要酶的过程。概括地说，酶的生产方法有提取法、发酵法和化学合成法三种。(一)提取法 提取法是最早采用并且一直沿用至今的一种方法。提取法采用各种技术，直接从动植物或微生物的细胞或组织中将酶提取出来。提取法虽简单易行，但必须要有充足的原材料，这就使提取法的广泛应用受到了限制。但是，在动植物或微生物资源 ...

酶的提取和分离纯化(一)细胞破碎处理 许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多，主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜，使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改 ...

酶标抗体的质量鉴定与保存1． 酶活性和抗体效价测定 采用双向免疫扩散法（稀释抗体）和DAB-H2O2显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。2． 酶量和IgG量 酶量（mg/ml）=OD403´0.4 IgG量（mg/ml）=（OD280-OD402´0.42）´0.94´0.62 其中，0.42为酶蛋白本身（0.3）及结合戊二醛后增加的OD值，0.94为抗体 ...

荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）作为一种高效的光学“分子尺”,在生物大分子相互作用、免疫分析、核酸检测等方面有广泛的应用。

本文介绍了紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。

过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。

问：想知道肝素如何影响a-l-岩藻糖苷酶的测定，原理是什么，哪位专家可否告知？ 答：常用抗凝剂中肝素对反应有正基质效应，分析原因可能为肝素系多聚阴离子，表面带有大量的负电荷；在弱酸性条件下（pH=4.8，AFU酶催化最适pH），反应体系中蛋白质、脂蛋白等多带正电荷，易与肝素作用形成不溶性复合物。枸橼酸盐对该反应有负基质效应，可能与其和PNP/CPNP类底物有反应，具体原因尚需进一步的证实，终点法类 ...

问：有人提到一种酶缓冲液提供酶反应条件，酶蛋白即催化底物明胶，不知道是怎么回事情。我要测定活性和分泌。我知道是要使用聚丙烯酰胺凝胶电泳的，请教具体的实验方法很所需要的试剂。谢谢！ 答：Type IV collagenase 72-kD is officially designated matrix metalloproteinase-2 (MMP2). It is also known as g ...

问：检验科常用的碱性磷酸酶测定方法的精确度是多少？ 答：精密度常以变异系数CV表示，包括批内和批间两种。国内有报道碱性磷酸酶的批内CV%为2.06--2.36%，批间为2.74%。江苏推荐的碱性磷酸酶RCV为7.5%。另外值得注意的是：血清置于室温或冰箱贮存，碱性磷酸酶活性会慢慢增高。 问：血清置于室温或冰箱贮存，碱性磷酸酶活性会慢慢增高？为什么啊，应该是酶会降解导致活性下降啊？ 答：&ldquo ...

问：求3-磷酸甘油醛脱氢酶测定方法及材料，感谢！ 答：楼上说的就是GAPDH，主要用来做内参的，我现在就是用这个 做内参，你可以上网找这方面的信息，就是在结合二抗的时候按照一定的比例加到二抗里面，一起结合，效果很好。 ...

问：哪位大侠做过测定土壤脱氢酶活性的实验，请指点迷津啊，先谢谢了。我在做标准曲线时，加入萃取剂（甲醇或丙酮）后，各管的上部出现沉淀，红色溶液位于管的下部，上下颠倒摇匀后各管都变混浊。放置一段时间后各管都变澄清，但均为无色，如果不上下颠倒而只是振荡最终也会都变成为色的澄清溶液，这是为什么啊？ 1 标准曲线的制作 1.1配制不同浓度的TTC液：从1mg/mlTTC溶液分别吸取1，2，3，4，5，6，7 ...

问：试验做5脂氧酶的体外酶活试验，用于对药物的筛选，但是测定方法如果采用试剂盒的话，价格很贵，请教各位有谁做过比较方便的测定方法，希望大家给予帮助，谢谢！ 答：酶活的测定：0.2ｍＬ酶液移入20℃，0.8ｍＬ底物（底物配制：0.25ｍＬ吐温20分散于10ｍＬｐＨ9.0的0.2Ｍ硼酸盐缓冲液中，摇动下逐滴加入0.27ｍＬ的亚油酸，充分混匀使亚油酸的微细状体分散于液体中，加入1Ｎ氢氧化钠1.0ｍＬ摇 ...

问：有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问： 1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置？也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。 2、整个反映体系配置须注意哪些问题？最后加DL-甘油醛还是NADPH。 3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度？请各位指教，谢谢。 答：在测定酶的活性时，有时由于酶的纯化不足，导致影响结果，在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点： （一） ...

问：请教各位高手：晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤！谢谢！ 答：不知你要用那种方法测定？一般常用以下两种你可以作参考：配反应体系时注意要临用前加DL－甘油醛和NADPH。作NADPH标准曲线时NADPH至少要梯度稀释5个浓度。 如果不够详细你可以问问作者，山东潍坊医院内分泌科刘长山教授。 荧光法：血样1mI，加肝素抗凝管，1500g离心10分钟，红细胞用10倍体积的等渗盐水冲洗三次，加4倍体积 ...

问：各位大哥大姐好！小弟想测定一下本人分离出的拮抗菌是否为分泌出的几丁质在起作用！想采用在含有胶体几丁质的平板产生透明圈初步测定方法，但在实验准备过程中，碰到了些困难！首先，几丁质不知道哪里有卖的，打了好多家试剂公司，都没有；其次，胶体几丁质配制的方法，国内参考文献描述的有好多，我不确定哪中方法适用，能有结果！恳请园子里做过这方面实验的大哥大姐能帮我解决上述两个问题！ 答：这里面有胶体几丁质的配置 ...