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freezingfall 大家好，我最近做的Pretro-HIG-XX以及对照Pretro-HIG的转染胃癌细胞系SGC7901，用的是lipofectamine2000试剂，六孔板按照protocol步骤转染，连续三次转染之后对照组的细胞均死亡，换HD试剂转染后不存在这种情况，可排除质粒问题，请问各位战友，究竟是什么原因导致如此现象，困惑中~~~~~~~~~~~~zhujoker 自己注意一下你的转染试剂是不是假的，我估计这个 ...

3200 本人最近需要使用到PDTC做一批大鼠实验，由于新手上路，请请教各位战友，PDTC该使用何种液体配制（有人说用水不易溶解），配制后采用何种方法灭菌（是否耐高温）？如何保存？不胜感激！！叩谢3200 再次叩谢各位战友，比较急哈，可以直接讲解，也可电邮luohan_32008462@163.com.谢谢，谢谢！haodanzhang 配制：一般用双蒸水溶解，不好溶解的话可以加点DMSO，然后用双蒸水稀释至相应浓度。灭菌：可以用0. ...

viola2010 您好，我是新手，我想在细胞中导入wnt1基因，希望基因导入后能够稳定表达，在参考文献上看到HA-tagged Wnt1 expression vector (pHA-Wnt1），是如何构建的？怎样转染进入细胞？其中PHA其中是什么？质粒吗？还是。。。chenhaombb PHA是质粒。先得到目的基因，再连接到载体上，转染即可woxingwosu 更确切的说，pHA应该是一个带有HA的标签（tag）的载体（可能是作者自己构建的）， ...

cindy10moon 写综述，看到一篇文献提到Cysteine string protein (CSPa)，说是HSP40家族中的一员，哪位高人知道怎么翻译？说和神经再生和突触传导相关，小妹**！zhujoker 半胱氨酸串联蛋白质好像比较合适了，自己再找找吧cindy10moon zhujoker wrote:半胱氨酸串联蛋白质好像比较合适了，自己再找找吧谢谢，直译是这个了，不过网上搜不到这个中文名称，所以不太敢用本文由丁香园论坛提供 ...

liufengxi HIV-1 Tat (47-57) N-term Cys 序列 H-CYGRKKRRQRRR-NH2 ；原始HIV-1 Tat (47-57)序列为YGRKKRRQRRR 。N端的半胱氨酸修饰是为了利用其含有的巯基和其他分子反应，但是C端得-NH2的修饰是什么目的呢？有这个修饰的必要吗？是为了增强多肽的活性，还是发挥一个阻断活性COOH的作用？ 附件是关于HIV-1 Tat (47-57) N-term Cys的产品介绍。请高手指导.dnazyme 个人愚见：C端得 ...

mckf111 现在用pEGFP-IRES2载体转染黑素瘤B16F10细胞 筛选前转染效率有20% 先1：10传代 再用700-1100mg/L G418分组筛选 基本3天后就没什么绿的了 我晕 两个月啦 就这么耗时间 后面实验。。。大家有什么建议啊bioenw 你可以考虑换个高转染效率的方法，比如用病毒构建稳定细胞mhz9988 G418浓度太高了，一般筛选浓度为400ug/mlzwh2004 在做稳定细胞株之前首先要摸清楚G418的使用浓度，不同细胞对G4 ...

feishi68 血清mirna抽血后怎么保存？运输？zhujoker 放在干冰里面就可以了。yanglong 最好是直接就做反转录，实在是没有条件反转就-80或者液氮等保存了。赵东生 请教一下，可以不提取RNA,直接拿血清作为模板做RT吗？pandace 好像那样直接用血清反转录做miR效果不好。。我之前从血清中提取过miR，量不是很多。需要用ABI那个与扩增盒子好像才有比较好的结果。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

zhaozhuozhao 各位大侠，我想请教一下：我的药物可引起细胞内活性氧的升高，NAC+药物组细胞内的活性氧检测与给药组几乎无差别，为什么呢？NAC不是或熊样的抑制剂吗？帮帮忙吧zhaozhuozhao 各位老师帮帮忙啊fanjingol 你是怎么给药的？具体的模型你说一下，又是怎么测的ROS？你要说清楚啊！zhaozhuozhao NAC我是买的碧云天的粉末，我用超纯水溶解配成10mmol/L的浓度，氢氧化钠粉末调pH值 ...

三水223 western blot 跑出三条带 请问这三条带分别应该怎么命名 请教达人 在线等……fanfine85 老兄，你的casepase是怎么跑出来的呀，我都做不出来seagate 太夸张了，泡成内参了gutao 跟标准marker比对啊，哪条带子符合caspase8的分子量，就是哪条了。用western 跑cas8是非常难的，我当初用santa crua的抗体跑了N遍都跑不出来，后来改用其他方法才勉强解决。楼主这么清晰的条带，是怎么跑出来的 ...

knightkidd 如题：手上如果有若干病历样本，如何从中筛查出未被报道过的基因突变位点？！最近在做SNP位点检测试剂，想了解前面的工作是如何进行的，如果哪位高人做过类似研究请指点！！yyyantopbt 这方面的实验我们做了很多，有需要可以交流，qq42020496。pingnana 您知道如何用基因克隆的方法鉴定双等位基因突变还是单等位基因突变吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

tyssxlth 老板想检测某个基因在癌组织与癌旁组织中是否有碱基突变，请问一下大家应该怎么做？tyssxlth 顶起来！dnazyme 主要用PCR吧。如果谨慎些，可以从宏观到微观选用方法，例如，宏观上看看有没有易位、缺失之类的片段变化可以用核型分析之类的手段，最后再研究是否有点突变，例如chip、pcr等。还有很多新花招，FRET之类的，你查文献吧。yyyantopbt 最简单的方法就是PCR扩增出这个片段，然后测序观察，直 ...

nysummerer 听说是science旗下的杂志，但感觉并没有nature系列那样知名。vparp 6.120nysummerer 谢谢您！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小米丫丫 请问哪位有知道北京有没有做膜片钳的公司或者实验室吗？就是不用自己去做的那种。请知道的一定回复我一下啊。万分感谢！！！mengyou999 爱思益普 ICE BIOSCIENCE梦飞扬674868990 北京爱思益普 ICE BIOSCIENCE，跟这个公司交流过，很不错的一家膜片钳公司。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

myz68mrq 想做细胞的Notch调控，常用的Notch激活剂有哪些啊？zhujoker 有rhNF-κB参考下面2篇文献： Wnt和notch信号通路在肿瘤干细胞自我更新中的作用 ，myz68mrq 谢谢回复。现在有研究者使用Recombinant Rat Jagged 1 Fc Chimera，作为Notch的激活剂，不知在选择上有何不同？yuncen 忘记从哪看到 EDTA可以激活notch通路，当然非特异本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

cnstr14 有个问题请教一下前辈们，当质粒与感受态菌混在一起做转化时，同一个菌是否有可能吸收进不同的质粒载体，比如同时吸收了含有不同目的基因的载体进入细胞？若有可能，那为什么挑去单克隆去测序，往往是单一目的片段的。若不可能，请告诉我为什么。谢谢zjubell cnstr14 wrote:有个问题请教一下前辈们，当质粒与感受态菌混在一起做转化时，同一个菌是否有可能吸收进不同的质粒载体，比如同时吸收了含有不同目的基因的载 ...

lidonghong 各位坛友：大家好！请教一个问题：提取幽门螺杆菌基因组用哪个公司的试剂盒最好，试剂盒最好是越便宜提取效率越高越好！谢谢啦！freecell 哪个最好，取决于使用者自身感受。国产试剂盒大同小异，价格也没有多大差别。lidonghong freecell wrote:哪个最好，取决于使用者自身感受。国产试剂盒大同小异，价格也没有多大差别。谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方 ...

joo 如题，要做衰老，没有决定定哪家的SA-bata-gal的检测试剂，请教大家都用什么呀？另外看到碧云天很便宜，谁用过他家这个产品吗？joo 求助！joo 自己顶！zmz_1 I am using this in Boston, works very well. check the data sheet.applied biosystemshttps://products.appliedbiosystems.com/ab/en/US/adirect/ab?cmd=catNavigate ...

daydayblue212 小菜鸟求助各种大虾gene amplification 、gene gain、gene loss、gene deletion都是什么意思啊DNA copy number gain 和DNA amplification刚开始学看文献，不知道两者的区别是什么万分感谢zhujoker 都不想回答了，自己不会google一下吗？freecell gene amplification : 基因扩增gene gain：给缺乏某种基因的细胞“添加”上去gene ...

zaiju512 求Ca2+振荡产生Ca2+波通过缝隙连接传递的彩图！！谢谢！！zaiju512 急需！！！zaiju512 自己顶起！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

myskite 将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系，有人做过吗，分享一下。bioenw 我做过miRNA的稳转实验，我们可以进行交流。版主zhujoker留言:不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM，也不要变相打广告myskite 我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体，正在准备细胞。据说，这个实验，细胞爱死？还有，用G418溶于培养液后，用滤吗？如何挑单克隆？wingofwind1029 我用pcDNA ...