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llj1985 图中，GAPDH基因箭头方向向左，而其他的基因有的箭头方向向右，或向左，请问这个箭头是什么意思？lmnsmu 这是Dundefined*段，DNA作为转录的模板具有不对称性，意思是DNA的两条链都可以作为mRNA的模板，但具体到特定的基因，它是有方向性的，只能以其中的一条链为模板。比如说GAPDH，箭头向右（5→3），意味上面的DNA单链是它的模板；而NOP2等箭头向左，表示它以上面DNA链的互补链作为模板。里子 学习了本文由 ...

Burnell pBT载体多克隆位点酶切：见附件由于酶切位点离得近，用NotI 和 XhoI 是否能同时进行双酶切，还是需要分部酶切？另外，分别含 NotI和XhoI酶切位点的修饰引物一般需要几个保护碱基？Burnell 期待各位朋友为我答疑解惑，最近实验很郁闷，很悲剧！angler5156 不知道你用的什么公司的酶进行酶切的！这边有个网站是对酶切和保护碱基的设计的！比较有效！你参考下！http://www.neb.com/nebecomm/t ...

zhang201009 哪位高手能指点一下MAPK特异性抑制剂的使用方法？我培养的是海马神经元。:)谢谢谢谢shutaozheng_824 MAPK信号通路通常有3个主要的成员（ERK1/2, JNK1/2和p38），相应的抑制剂为U0126（还有一种PD98059，溶解性较差），SP600125和SB203580三种。使用的方法是先用DMSO先溶解成母液，然后在用无血清的细胞培养液稀释成工作液浓度。由于胎牛血清中还有较多的细 ...

lsdcfhyj 各位前辈，请问测定荧光素酶报告基因的荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒？还有将含荧光素酶报告基因的质粒转染到癌细胞中建立稳定的细胞系，用哪种转染方法好些，建立稳定转染细胞系困难吗？大概几代后转染的基因会丢失？我查看了很多文献，但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器，希望做过这方面的前辈能给我指点一下，谢谢阳光海岛 荧光素酶的反应：Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)== Oxyluci ...

stillhorse 检测细胞的VEGF表达量，因为是分泌型蛋白，成熟体都分泌在胞外，大部分文献都是取细胞培养液上清做Elisa。如果实验要求不能检测上清液，可否用Elisa检测细胞内部的VEGF表达？胞内胞外的VEGF表达量是平行的，还是相对的？stillhorse 谢谢斑竹！那么是不是内部表达的VEGF高了，就说明细胞分泌在胞外的也高？二者的量是平行的吗？stillhorse 自己顶~~~期待做过胞内VEGF检测的高手 ...

mqjstudent 我现在需要测小鼠血液的胰岛素浓度，试剂盒给的标准样品单位为mIU/ml ,请问该如何换算?freecell 自己google一下 胰岛素换算，结果一堆。怎么这么懒呢，唉。http://blog.163.com/mxzhang81@126/blog/static/30062181200811521029937/limitless 能不能问下lz用的是哪个牌子的试剂盒tienam 园子里有，搜一下吧。本文由丁香园论坛提供， ...

紫藤树 ΙΚΚε缺乏的小鼠肾小管上皮细胞可以买吗，在哪有?朋友们帮忙找一下，急用！！！！ylhuang0502 在ATCC上试试：atcc.orgfindlg atcc不是很会用啊，百度里面搜不出来吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

cn981 大家好，请问钙的螯合剂BAPTA-AM负载细胞时所用的负载液体是无钙的还是可以有钙的？我的看法：既然BAPTA-AM能螯合钙离子，那么在细胞外也能结合大量的钙离子，如果负载液有钙，BAPTA-AM有一部分会与钙离子结合，然后进入细胞内，这导致了单纯BAPTA-AM浓度的改变，同时也会促使一些被螯合的钙离子借助BAPTA-AM进入细胞，虽然进去以后也是螯合状态。不知道这种看法正确吗？请大家指正。另外，用BAP ...

游上岸的鱼 敢问各位大侠：平时都是如何追踪有关分子生物学前沿技术？有没有关于分子生物学技术进展的网站？恳请各位大侠介绍下。。感激不尽！！！freecell 多看看顶级杂志。先进的技术都是从那里总结出来的。游上岸的鱼 :)谢谢freecell斑竹本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

papa0210 我检测到细胞内 p-ERK 升高， 同时总的ERK也升高，这能说明ERK被激活了吗？？谢谢大家了papa0210 谢谢大家了fangweibin119 有做内参校正？papa0210 有，用的Tubulinylhuang0502 做densitometry,然后用p-ERK的灰度值除以ERK，即得到p-ERK/ERK的值，然后再对你的对照归一化（normalization),再看是否升高。这个实验涉及统计处理，所以，n至少要3-4 ...

xumin19851019 本人最近需要对一批测序克隆进行进化树分析，但是看文献好像有多种不同的进化树构建方式，不知道哪个软件比较合适？我想构建的是细菌的进化树，哪位高人如有能否发我一个啊？xumin101977@163.com 不胜感激！freecell 参考文献啊，有很多的，例如mega。cz8826720 用mega吧，这个软件是最专业的！yuandong 中低端：MEGA(free)http://www.megasoftware ...

erythrocyte2005 看到分型Ⅰ，Ⅱ，Ⅲpi3k的分型是依据什么？各型有什么差别？ylhuang0502 "The classifications are based on primary structure, regulation, and in vitro lipid substrate specificity."You may check the following website for detailed information.http://en.wikipedia.org/wiki/ ...

horizon801 该文是我撰写的一篇综述《后基因组十年志》的部分内容，请园子里战友指正，多提意见，欢迎投票！后基因时代10年间生命科学的发展与所面临的挑战8月2日，我国科学家利用“全基因组关联分析”的方法，在人类1号染色体上发现了肝癌的易感基因区域。这将为肝癌的风险预测、早期预防和个体化治疗提供理论依据。事实上，自2000年人类基因组草图绘制完成迄今，科学家已经相继发现七十余种疾病的易感基因，基于此的基因诊断产业 ...

jldx 是这样，我有一个基因全长的质粒，想研究其中某一个domain，想省点力气不想直接走这个PCR的过程打算单酶切再连接，但并没有合适的酶切位点，有个位点很接近，但是还多余出100多BP，也就是另一个domain的一部分。这样表达出的蛋白，肯定包括目的DOMAIN，不过会不会也包括了另外一部分其它的DOMAIN氨基酸？在功能上和用传统的PCR方法表达出单独表达目的DOMAIN的蛋白会有区别吗？盼解惑，多谢！gi ...

小pig 之前看到有这个课件，现在找不到了，有哪位大哥能再发一次，谢谢freecell 本人孤陋寡闻，没有听说过“多基因沉默"这个概念；丁香园内搜索，也没有这个名词。不知“之前看到有这个课件"这个说法从何而来？小pig 我已经找到了，是沉默染色体的传播的课件。我是在丁香园上面看到的，中文就是多基因沉默，但内容是染色体沉默的传播本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 ...

峨眉茶客 HepG2、Eca-109、L0V0各是什么细胞？初学者不懂，望各位GG、JJ赐教freecell HepG2：人肝肿瘤细胞株Eca-109：人食管癌细胞LOVO细胞：人结肠腺癌细胞株建议楼主养成google的习惯。峨眉茶客 谢谢版主，我用百度搜了搜，没有收到。谢谢gingivalis 百度虽然口碑不佳，但也不至于那么糟吧。LOVO细胞 百度搜出来好像是 大肠癌细胞 啊，不知道跟结肠癌细胞有没有区别。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

snow359598589 求pAd/CMV载体的图谱，还想了解一下它转染细胞时要注意的地方，比如是否要脂质体包埋或者是别的载体辅助之类的freecell http://www.google.com/search?hl=en&client=firefox-a&hs=0XF&rls=org.mozilla%3Aen-US%3Aofficial&q=pAd%2FCMV+map&aq=f&aqi=&aql=&oq=&gs_rfai=upliz http ...

xuanmaochong 最近正在做一个蛋白与细胞相互作用，及未知受体的鉴定，请问各位有什么好的方法来鉴定蛋白在细胞上的未知受体？貌似我一点办法都没有啊！请教各位了！多谢！wangleisdnu could you try pulldown?use your protein as a bait and the whole membrane protein fraction as prey, do pulldown (if the receptor is membrane protein)Far western al ...

dadi_mama 最近做ERK抑制剂对实验动物的影响，要做PD98059腹腔给药，但不知道给多少剂量，给多长时间，是连续给三天，还是两周。另外，腹腔给药还是用DMSO溶解吗，DMSO对动物有没有毒性作用啊？谢谢各位解答！dadi_mama 请热心战友指点，谢谢！11shengsheng 请问楼主解决这个问题了吗，我也要做，至今还没查到相关文献，望指点一下 啊apple超人 楼主，同样的问题，求助鬼斧feng 楼主，同问，求助本文由丁香园论 ...

mnidr Shocked cells were added to 1-ml SOC, incubated 1 h at 37°C, and then one-half was spread onto agar to select CmR or KmR transformants. If none grew within 24 h, the remainder was spread after standing overnight at room temperature. After primary selection, mutants were maintained on medium without ...