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zhanghai123 大家好！我最近在做一个受体对一种靶蛋白的调节作用。通过WB分析表明这个受体被激活后能够上调靶蛋白的水平。Realtime PCR 分析发现受体激活后，该靶蛋白的mRNA不仅没有上升，反而是在下降的。这也能理解，因为这种靶蛋白是一种转录因子，本身对自己的mRNA具有负性调控作用。于是我分析可能这种调控作用是发生在翻译水平或者蛋白稳定性方面。我用放线菌素D预处理细胞，之后再加入受体激动剂，然后再WB分 ...

银钥灵 大家好~~我准备写毕业论文，可是就一个题目就把我难倒了，想请大家帮帮我，我的实验是将一种牛的DNA的一部分与一对引物结合，最后测序，就这样，怎样起名字呢？麻烦大家帮帮我~biolinkphilic 你连实验目的都没说清楚，怎么起题目呢？你说的貌似是实验手段，实验题目一般是实验的目的和用途。银钥灵 其实我都没有弄的太清楚实验就做完了，我做的大概是这样的，从那种牛的血液中提取DNA，然后老师给我一对引物，对加入引物的DNA ...

yaojun2006whu 有些公司的一抗介绍明确注明可以用于“流式检测”某蛋白磷酸化或某磷酸化蛋白表达水平，但用流式细胞术检测细胞内某蛋白磷酸化或某磷酸化蛋白表达水平对一抗有特殊要求吗？是不是未标明可用于流式检测的一抗，就不能用于流式检测呢？请教园中兄弟姐妹，比较急，谢谢！kern6549 流式检测胞内磷酸化蛋白一种抗体就够了，就是荧光素偶联的该磷酸化蛋白的抗体，不需要一抗、二抗、三抗什么的。yaojun2006whu ...

sophie777 请教下！有谁知道蛋白酶抑制剂是和刺激因子一起加到细胞里还在加刺激因子之前加？kern6549 刺激前1小时加。zhaozhuozhao 请教楼上，抑制剂在刺激前1小时加后，再单独加刺激还是抑制剂与刺激同时再刺激啊？谢谢kern6549 1小时后直接加刺激剂就可以了。不要换液。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongc ...

cdduanshui 谢谢斑竹和各位老师一直以来的帮助，在你们的帮助下我少走了很多弯路，还是提一个可能内行人会觉得很傻的问题：ras通路激活后最终是作用在哪里?就如这张图片上，如果是激活抑凋亡，那细胞是通过什么方法来抑制凋亡的？书上只讲了细胞质机构的改变，不是很明白。就比如说会不会最终作用于微丝或是微管等细胞骨架的?或者还有那些所谓的细胞质机构？麻烦老师讲一下，谢谢吴佰霖 的确，目前很多信号通路图能把一个完整的关键分 ...

zcx7792 哪些人和小鼠的肿瘤细胞系表达TLR4,MYD88,TBK1？哪位高手知道？不甚感激。zcx7792 自己顶一下lagopsis SKOV3livelyding 胰腺癌细胞株zcx7792 非常感谢二位本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

manlyboy 各位战友，由于实验需要；急需人甲状腺癌细胞株：我查到的国内的细胞库里面有的就SW579（人甲状腺鳞癌细胞株）和TT细胞（人甲状腺髓样癌细胞），有点儿贵，还没买。不知道各位战友有没有养人甲状腺癌细胞株的？其他的人甲状腺癌细胞株也行，越多越好。因为实验中还要对细胞筛选，看哪株细胞能够符合下面实验的要求。如果有，可以联系我，最好是北京地区，方便快捷，非常感谢。无论是购买或是合作都可以，我们这里也有我们实验室主 ...

baibai17 今天开题，导师问了个问题：ki67为什么叫ki67？当场傻住······恳请各位老师指教！谢谢。keavin521 The Ki-67 protein was originally defined by the prototype monoclonal antibody Ki-67 (Gerdes et al., 1983),which was generated by immunizing mice with nucleiof the Hodgkin lymphoma cell line L428. The name is de ...

两只小密封 不好意思，刚开始新的研究方向，涉及到要用基因敲除小鼠模型。有若干不懂的名词求助：除题目上的问题外，还有类似Egr2 f/f CD4 -/- (右上角的f和-分别代表什么意思呀？有时候还是+/-)。不知道我得问题大家看懂了没有。。。。。实在是汗。在线等答案。谢谢啦！！laddcat123 Egr2 f/f CD4 -/-:f代表是条件性沉默，利用Cre蛋白可以使其沉默-当然就是不表达woxingwosu 补充一下，cre-loxp是目前比较常用的基因敲除的办 ...

hp26695 转录因子只结合在DNA正链上，不结合在互补链上吗？谢谢我做启动子区多态性分析，发现T-C碱基转换后用软件预测发现在正链上无转录因子结合位点，对应的互补链上有woxingwosu 有这么一说吗？转录因子识别的位点应该可以是双链DNA吧?主要还是结合在有比较大的凹槽部位使得蛋白有空间进入结合区域就可以了。吴佰霖 与基因的转录方向一致但是记得双链是互补的，本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

cdduanshui 请教各位老师，myosin 2 和 nonmuscle myosin2有何区别？有没有人做这个的，能否提供一些资料，谢谢。cdduanshui 自己顶一下，希望各位老师帮忙zhujoker Myosin II (also known as conventional myosin) is the best-studied example of these properties.Myosin II contains two heavy chains, each about 2000 amino acids in l ...

jyy6223405 kern6549 你想问什么？jyy6223405 怎样用流式细胞仪测定p-ERK1/2jyy6223405 具体的操作步骤kern6549 1、制备样品的单细胞悬液。2、4%多聚甲醛固定细胞。3、打孔剂处理细胞在细胞膜上打孔。4、标记荧光素偶联的抗p-ERK1/2抗体。5、流式上样分析。yaojun2006whu 可参考下面http://signal.dxy.cn/bbs/topic/18528145?tpg=1&age=0 ...

霍一刀hxs 有没有一种基因数据库，输入癌症类别，即可以预测或查询出与此癌症相关的基因？多谢。吴佰霖 可能要多看综述了霍一刀hxs 吴佰霖 wrote:可能要多看综述了希望以后研究比较深了，可以有人建立这么一个数据库。suiyi223 可以参考美国NCCN指南，或者国内一些癌症相关的基因检测公司的说明书，不是很科研，但是还是可以一读的。例如广州益善公司霍一刀hxs suiyi223 wrote:可以参考美国NCCN指南，或者国内一些癌症 ...

yangjing87 小妹真心求教：我用尼日利亚菌素配测细胞内pHi的标准溶液，想请教如何配制母液？我查了说明书也问了公司，nigericin溶于乙醇甲醇，完全不溶于水，没有测试过溶不溶于DMSO。因为我做的是活细胞，乙醇甲醇什么的对细胞有影响，都不能用啊。我真心请教这个可以用什么溶啊？多谢各位了everywhere 同问。我也打算用这东西，请高人帮忙。young名 可以溶于DMSO。soluble in chloroform , Alc ...

yongliangwang102 心肌组织中cAMP含量测定，请问哪位同学或老师做过？如何提取心肌组织cAMP？注意事项有哪些？谢谢！meiying3061 我要测细胞培养基内的CAMP，我也不会呢，你知道了，可不可以告诉我啊圆圆痴 楼主有没有找到好方法呀，分享一下拉！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

hexi1985 各位战友，我想请教下PD98059使用问题。本人准备做大鼠动物实验，使用PD98059干预，但是参照文献都说1mg/kg溶解于DMSO中，分装保存，用时再用PBS稀释。可是文献里又提到DMSO浓度不超过0.1%容积比率。如果我按照文献以1mgPD溶解于1ml纯DMSO中，再稀释稀释1000倍来达到DMSO的0.1%浓度，就根本达不到我想要的50微mol/l的终浓度了，而且总的液体量达到1升，每只大鼠我 ...

zhaozhuozhao 各位老师，MAPK抑制剂如何使用，是在刺激因子之前预孵育一段时间后弃去再加刺激or在刺激因子之前预孵育一段时间不弃去直接加刺激orS直接与刺激共孵育？感谢您的解答，谢谢！kern6549 同时加就可以。zhaozhuozhao 请问一下哪种效果更好呢？因为我的刺激要持续24h，我怕先用抑制剂孵育完后弃去再加刺激24h，抑制剂的作用早就没了，您说呢？kern6549 不是说了同时加吗？zhaozhuo ...

tianjiaoya PJ694α (MATa trp1-901 leu2-3,112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2 ∷GAL1-HIS3, GAL2-ADE2, met2∷GAL7-lacZ).gingivalis Check here:http://www.yeastgenome.org/alleletable.shtml%22dnazyme 对，分段查看就懂了，例如，MATa是结合型， Δ意味着缺失突变。本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

whiteswan 本人按文章要求，将1mg SP600125溶于125ul DMSO成透明溶液，然后将上述125ul溶液添加于1375ul PBS,有絮状沉淀析出，请高手帮忙指点解决该沉淀析出问题，谢谢！whiteswan 似乎应该xiemengxipan 请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀，我也在做这个实验，方便的话留个QQ交流下。不安分得土壤 xiemengxipan wrote:请问楼主的实验做完了没，能否传授点经验给我呀 ...

flhua 今天看文献，看到有人用这样MycHis-tagged载体，不知是何原理，请大家解释一下。这是我刚才查到的内容：“载体名称：pcDNA3.1/myc-His载体类型：哺乳动物细胞表达载体: 载体大小：5.5kb (5493 bp)载体宿主：大肠杆菌，哺乳动物细胞（E.coli, Mammalian cells）细菌抗性：氨苄西林（Ampicillin）真核筛选标记：新霉素（Neomycin）5' 测序引物：T7 prime3' 测序引物：BGH primer ...