细胞成分提取

狼伟人坯子 由于课题需要，需要做乳腺癌方面的通路研究，思路问题想和大家探讨一下，希望大家多多指正：1. 某个细胞因子（暂且定义为A）的siRNA干扰48h后，提RNA和Pr，检测细胞膜上某个蛋白（暂且定义为B）的表达水平变化（前期实验结果表明，RNA水平下调，蛋白水平还未做）2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt，NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB3. A siRNA 干扰48小时后，NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或 ...

淹没尘埃 我做的实验模型是血管性痴呆 ，需要把海马组织匀浆，然后从中提取线粒体，然后做COXII的RT-PCR,还有要用线粒体做别的三项检测，也不知道这个线粒体的量能不能足够哦，请问在这个海马组组织匀浆过程中，需要添加什么试剂吗？比如说线粒体提取剂什么的？请指点！谢谢！爱在进行时 下面给出一点参考步骤，希望有用：一、原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将 ...

向左还是向右 我是第一次做实验，想从人的外周血中（加过抗凝剂的）取血清，然后用淋巴分离液提取单个核细胞，从单个核细胞中同时提取RNA和蛋白，不知有没有前辈做过类似实验，请赐教，十分感谢向左还是向右 我用的TRIZOL同时提取的RNA和蛋白，可是蛋白怎么也溶解不了，不知有没有好办法？大胜仔 首先呢，加过抗凝剂取的是血浆，不是血清，我也查了查“Ficoll密度梯度离心法”对于单个核细胞的提取这个方法好像好点儿本文由丁香园论坛提供 ...

咪咪土拨鼠 各位大侠好，我是外科学的医学生，现在在实验，提的问题很弱智，大家勿拍。我做目的蛋白的western, 发现其在处理组有明显的分子量漂移，初步推测其为磷酸化改变---因为再同时加了一种激酶的抑制剂后，这种漂移消失了。但问题是，怎么证明它确实是磷酸化呢？我查了查文献，目前常用的是放射性P实验和质谱分析什么的，但这对于我们的条件和经费来说，似乎不太可能。我的问题：1. 是否可以在用RIPA裂解液提总蛋白时，加入蛋白磷酸酶（大 ...

mirror122 请问大家谁做过从血浆中提取总RNA 包括microRNA，我要对里面的microRNA进行定量检测。请教一下实验方法，哪个公司的试剂盒比较好。谢谢！906003500 takara 或者 英潍 都挺不错的。2004112841 我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126，做的还可以，也有文献用这个。clothilde 2004112841 wrote:我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126， ...

iiyuan 有人用invitrogen的trizol 提取哺乳动物组织蛋白吗？效果如何？O(∩_∩)O谢谢 回复wangke80 这个问题我刚好前段时间检索过，你可以参见两个丁香园的帖子：1：http://www.dxy.cn/bbs/thread/4474660#44746602：http://www.dxy.cn/bbs/thread/6296746#6296746另外的我其它地方查到的内容摘抄如下：在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的 ...

kadvc 我今天打算从组织中提纯线粒体，随后从中提取RNA，但是我今天进行不完，所以我想明天提取RNA，但是如何保存线粒体我不知道。我提纯线粒体用的是QIAGEN的试剂盒，最后要把线粒体放入storage buffer。然后可以保存到明天吗？多少度呢？求大神们帮助，感激不尽！！！！2004seedfive 你好！我是做植物的，不知道你说的质粒提取试剂盒是否适用，谢谢上海丰核信息技术 线粒体提取出来，最好尽快做实验。线粒体是能量合 ...

华丽转身然后悲伤 我很想知道caspase3 的前体pro-caspase3 在细胞中的存在情况，希望大家帮帮忙zhangy1027 Caspase家族Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点：①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性；②总是在天冬氨酸之后切断底物，所以命名为caspase（cys ...

fengtingting2010 小鼠T细胞中beta-Actin的含量是多少啊，我要算小鼠T细胞中Foxp3的含量，如何知道呢？还有Western blot的抗体最适的稀释度如何确定，是全部做完后，拍片才能确定吗？一般加的抗体的体积是固定的吗？是10ul吗？fengtingting2010 如果上样量是20ug，体积是10ul。一抗和二抗的稀释度和体积如何确定呢？如何知道目的蛋白的丰度？万一目的蛋白的量仅在ng级别怎么办 ...

push 1、如何从组织/细胞中提取线粒体总RNA？请各位大牛指点，谢谢。2.目的基因编码的蛋白质A在线粒体中有表达，此蛋白质A是一种核编码的蛋白质；请问能否从线粒体中提取到A蛋白的mRNA?如何提取？谢谢各位指点。knightkidd 应该只能梯度离心分离细胞器然后分离MRNA了吧，如果蛋白是表达在线粒体里应该能在线粒体中提取到其MRNA毕竟要运送到核糖体进行翻译的，不过量就难以判断了，可以试试！woxingwosu 仅 ...

pozeta 我做的是梗阻性黄疸的大鼠模型，想要测定模型的肝细胞内钙离子浓度，有什么具体方法呢？希望园子里的前辈指教！！ylhuang0502 这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的Ca2+ indicator如fura-2, fura-4，你如果要测绝对浓度，则需要钙离子标准液，要麻烦一些。pozeta ylhuang0502 wrote:这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的 ...

山百合 最近想测细胞内钙离子的变化，由于实验室条件有限，只能去外单位用别人的共聚焦显微镜看。但我的老师提出了问题，钙离子浓度是实时变化的，是否在处理之后有累积效应？我担心的则是处理后用Fluo-3 AM负载后到去外单位检测中间至少有半小时到1h，胞内钙离子会不会变化？（因为我的处理因素是磁场）这段时间是否荧光会有淬灭？我想了想，是否可以用固定剂将细胞固定上？查了些资料，貌似钙离子都是要借助通道或载体来运输的，固定好的细胞 ...

zjhua 请问在亚细胞定位里面，把线粒体分成几个部分，其中有一个mitoplasts（MP）是什么意思？lmnsmu mitoplast是有丝分裂质。zjhua 谢谢lmnsmu，我也知道是有丝分裂质，但是我没有找到有关有丝分裂质的资料，因此我想知道这个有丝分裂质是具体指什么？lmnsmu 非常抱歉，我不清楚mitoplasts（有丝分裂质）具体是什么，请高手给予解答。看到有些文献把mitochondrial inner membr ...

happylimi 请教：如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？happylimi 知道和裂解普通蛋白的buffer不一样了，要用TCA将蛋白沉淀下来除去，但是后续报道有用乙醚洗然后用60度氮蒸干的，但是这个我们实验室没有条件做，还有其他的后续处理方法么？ylcui 如果实验室有进口的探头式超声破碎仪的话，直接加PBS超声破碎悬浮细胞即可。有时要加磷酸二酯酶抑制剂。贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解B ...

topicare 逼人行将做一个关于基质金属蛋白酶（MMPs）的实验，阅读了一些文献，发现MMPs的功能较多，其中一个重要的作用就是在恶性肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用。此外MMPs的多水平调节也相当复杂，但是，目前已有的研究表明激素、生长因子、癌基因和细胞周期素均可影响MMPs的转录，其中IL-1、IL-12、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)均能上 ...

trick 准备做关于PKC 活化从胞浆转位到膜上的WESTERN由于是加细胞因子刺激，所以要收比较多的样品，如果要超离的话太麻烦了不知道各位有没有不需要超离的提取液体的配方由于先是做些预实验，暂时还不准备买试剂盒，但是如果大家有什么好的试剂盒也给推荐下吧:)licanming 我也需要做这个！但好像基本都是用超离和试剂盒做的！andyyu LB + 2% sds本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方 ...

sumu2006 Fura-2 AM 可以测细胞内钙离子浓度，请教各位高人，是什么机理？分离线粒体出来后，可以用这个染料测钙离子浓度吗？freecell Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2 AM的荧光比较弱，最大激发波长为369nm，最大发射波长为478nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合，结 ...

resalex 做nf-kb的研究，需要单独测定胞质内NF_kB在刺激作用后的变化趋势吗？？是否因为NF-kB与Ikb形成复合体在胞质中，而无法测定nfkb胞质中的变化(个人愚见）。查文献后，发现没有这方面的报道，一般都只关注nf-kb的入核情况（核内变化）？？？？00501101 胞质内的NF-kB的变化趋势不需要检测。第一，文献中确实很少看到做NF-kB表达情况的，但是有少数有。第二，个人觉得，NF-kB的表达是否增高与它的活化 ...

自从1977 年推出以来，二氧化硅胶体PercollTM已经成为全世界数以千计的研究人员对密度梯度介质的选择。其近乎完美的物理特征方便它在细胞、细胞器、病毒和其他亚细胞颗粒分离中的使用。Percoll做为第一步在进行更高分辨率分离或核酸抽提前富集细胞是非常有用的。人们会认识到在进行其他的这些方法前使用Percoll 做为第一步可以节省大量的时间和资源。对于生物学颗粒，理想的 ...

CD40活化B细胞（CD40-B细胞）在癌症免疫疗法中可替代免疫刺激抗原提呈细胞。本视频演示如何从外周血单个核细胞中获得充分活化的CD40-B细胞。