细胞培养

问：复苏的肿瘤细胞传代多久后，弃之不用并解冻新的细胞？在传代的过程中， 有时细胞长得太满， 都开始死亡了才传，对细胞有什么不良的影响，有没有固定的传代间隔时间？ 答：rumex认为培养的代数因细胞不同而不同，肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。 ...

Protocol for the Primary Culture of Cortical and Hippocampal neurons Solutions and media required: Poly D-lysine/laminin solution - pdf DM/KY - pdf Optimem - pdf Neuronal growth medium - pdf Set- ...

1、细胞株的培养和传代 培养： 用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，3～4天传代一次。 悬浮生长细胞的传代： 直接直接吸去或离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液悬浮细胞，1：3或1：5稀释细胞后，分瓶继续培养。 帖壁生长细胞的传代： 吸去培养液，用PBS洗涤细胞一次，加 ...

1、如果靶细胞是帖壁细胞，在细胞因子作用适当时间后，用生理盐水洗去死亡细胞，用0.25％胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打，使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。 2、如果靶细胞是悬浮细胞，则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再计数。通常用台盼蓝染色细胞，活细胞可以排除进入细胞的台盼蓝而不着染，死细胞着染呈深蓝色。 3、计数血细胞计数板上4个大方格中的全部活细胞，按下式计算活细胞 ...

促细胞分裂剂激活单核细胞 基本原理 ： 本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用，在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同，应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞，或两者同时，或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时，可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。 表1 常用的促细胞分裂剂和多克隆淋 ...

1、冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应 ...

一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 二、材料和试剂 1、细胞：贴壁细胞株 2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清） 3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、 ...

细胞受各种霉菌、细菌和支原体污染后，一般都较难排除或杀灭，其中以支原体更难排除，因此从预防着眼为上。 1、抗生素除菌法： 用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体 （1）抗生素制备：均可用PBS配成250×浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。 （2）处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养 ...

1、二倍体细胞培养法 二倍体细胞培养法与一般培养相同，关键在于传代，其传代程序为： （1）吸除旧培养液注入另瓶中。 （2）用温BSS冲洗1次。 （3）用0.25%温胰蛋白酶消化，加入消化液量以仅覆盖细胞层即可；作用1~5分钟。 （4）待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大，便终止消化。为防止细胞丢失，可不必再用BSS冲洗，直接向瓶中加入培养液（新旧培养液按2：1新旧混合）。 （5）轻轻反复吹打制 ...

1、初代消化培养法 （1）准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 （2）布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 （3）处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 （4）剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~5 ...

问：大鼠卵巢颗粒细胞的分离方法？ 答：大鼠颗粒细胞的分离方法一：分离23天的SD大鼠，皮下注射DES（2.5 mg/只），连续三天。于最后一次注射24h后，颈椎脱臼处死动物。无菌收集两侧的卵巢，置于盛有PBS的EP管中清洗。将PBS清洗的卵巢放在盛有培养基的平皿中，在体视显微镜下，用25号针头刺破卵泡，释放出颗粒细胞。后吸取平皿中的细胞悬液，镜下计数，接种细胞。培养基（McCoy's 5A Med ...

一、血清灭活问题。 1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？ 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？ 回答a：血清都是灭活是56℃30min。每次我都是这样灭活的。 回答b：应该是分血清的吧，若已灭活，就不用灭活了，未灭活，最好还是要灭活的。 回答c：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养 ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

一、原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 二、仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：胎鼠或新生鼠 试剂：1640培养基（含20 ...

一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟---& ...

1、细胞（组织）培养年鉴 1878 Claude Bernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。 1885 Wilhelm Roux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。 1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的 ...

问：我的细胞缺氧达到12 h后，观察细胞形态还是很好，24h好像还不明显，48h好像都坏死了。正常不应该要这么长时间吧，是不是混合气有氧还是密闭容器不够密？ 答：我们实验室在做缺氧时用的是1%的氧气，这样的情况下细胞需要持续缺氧48h以上才可见损伤的。对于细胞缺氧而言，单纯的缺氧一般达不到很好的损伤目的，所以现在多做的是缺氧和缺糖同时处理，因为细胞只有在缺糖的条件下才对缺氧损伤敏感，建议可以试试。 ...

问：我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样。一般传代（1传2）后大概16－20个小时左右就能够长到90％，请问是应该一定等到24小时再传代，还是可以等长到90％（<24小时）如果没到24小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？ 答：很多试验中要求分盘后24h时再开始实验 ...

每当心情不好的时候细胞总是长不好，原来凡是有生命的东西都是要用心对待的。 对它随意的吹打，心不在焉的换液，不准确控制时间的消化，不经意的摆放，它都能感受到并反映到细胞的性态上。一直抱怨细胞不好，而没仔细想自己是以怎样的心情在对待它，上清里的悬浮物就是自己杂念的反映，细胞变得松散，没有透光性，甚至污染都是由自己的不用心造成的。 那些死去的细胞的残骸浮散在整个细胞瓶里，尚存的在死亡边缘挣扎的细胞不断垂 ...

1.培养板(如96孔等)细胞实验的缺氧装置: :塑料泡沫盒 1 个;橡胶导管两个;玻璃胶; :如图; :进气孔应该在里下位出气孔应在上外位(因为通的气体密度较大);导管 与泡沫盒连接处用玻璃胶封好. :将培养板放入盒子后盖上盖子用纸胶封好然后往里通气(CO2和N2的混合气)10分接着用止血钳把两个导管夹住密封.最后可以把整个盒子放入37度孵箱内. 2.细胞瓶内细胞实验的缺氧装置: :医用输液器; ...