常用设备/其他

Yeast sporulation (liquid)1. Grow a saturated yeast culture in YEPD.2. Take 0.2 ml and put into 5 ml sterile water. Spin 3-5'.3. Pour off water; resuspend cells in 5 ml 0.3% KOAc + 20 µg/ml Adenine + any required amino acids because of homozygous mutations.4. Incubate with aeration for 3-5 days at 23ºC (usually 4). Ob ...

FROGGINGFrog is 8x6 prong. keep in EtOH, flame, then dip in sterile dH2O before use. Dip & swirl into yeast diluted in microtiter plates. Place on dry plate 1-2sec, remove, will leave 1-2 ul.Serial dilutions (in steril water on YPD) -8 samples x 6 dilutions. Aim for initial dilution at ~OD 0.1 in 250 ul. 5X dilutions (do ...

Frozen PermanentsYEAST1) grow culture to stationary in YEPD2) Add 0.8ml of culture to 0.8ml of 30% glycerol in labelled freezer vials3) vortex and place at -80oC4) for strains with plasmids, pick a colony from a selective plate, grow to stationary in YEPD and freeze in glycerol. streak out on selective p ...

Protocol for Sending StrainsYou will need:Sterile pieces of foil (about 2.5 inches square). (Sterilize and store in a glass petri dish)1/4" sterile disks (from Difco, #1599-35, concentration disks 1/4", sterile blanks)Remove a disk from the bottle using a sterile toothpick. place on a piece of st ...

Removal of Counts : NaOH MethodUnwrap the membranes and stack them in a pile (Do not dry out the membranes completely). Place them individually into 1L 0.1 N NaOH 0.2 % SDS wash solution for exactly 20 min. Pour off the wash solution and neutralize with 1 L 0.5 M Tris (pH 7.5) 0.2 % SDS for 20 min. Place the membranes on 3 MM paper. Let ...

YAC transfer by Kar1 mating:Reference: Hugerat, Y., Spencer, F., Zenvirth, D. and Simchen, G. (1994). A versatile method for efficient YAC transfer between any two strains. Genomics 22, 108-1172. Spencer, F., Hugerat, Y., Simchen, G., Hurko, O., Connelly, C. and Hieter, P. (1994). Yeast kar1 mutants provide an ef ...

The light microscope, so called because it employs visible light to detect small objects, is probably the most well-known and well-used research tool in biology. Yet, many students and teachers are unaware of the full range of features that are available in light microscopes. Since the cost of an ins ...

1.实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌 ...

Good sterile technique is the first and most important step in insuring consistent results when employing recombinant DNA and protein expression techniques. Sterile technique refers to procedures by which cultures may be manipulated without infecting the worker or contaminati ...

Each time the microscope is to be used it should be set up correctly to give a good image. Most often users forget to adjust the iris diaphragm and focus the condenser to give its optimum performance, this could result in objects in the preparation being undetected. There are many microscope set up procedu ...

由于电镜产生的电子束穿透能力很弱，必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。 在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。 一、 取材的基本要求 组织从生物活体取下以后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部各种酶的作用，出现细胞自溶现象。此外，还 ...

1、 湿热灭菌在同样的温度下，温热的杀菌效果比干热好，其原因有：①蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，因较大同一温度的干热空气中易于凝固。②温热灭菌过程中蒸气放出大量潜热，加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所要温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。③湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。 　　湿热灭菌法包括有：　　（1）煮沸法：煮沸 ...

实验 植物体内可溶性蛋白质含量的测定植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。本实验将分别介绍这两种方法。一、考马斯亮蓝法【原理】考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染 ...

一、原理 研磨叶片得到的匀浆，经过滤、离心可制备叶绿体。叶绿体的被膜比较脆弱，分离叶绿体应在等渗的缓冲溶液中， 0 ～ 4 ℃温度下进行。叶绿体活力会随着离体时间延长而不断下降，因此，分离工作尽可能在短时间内完成。 二、仪器设备及试剂 （一）仪器设备 冰箱， 800 型离心机，扭力天平，显微镜， pH 计，研钵，量筒，移液管，离心管，脱脂纱布等。分离器皿都须在 0 ℃下预冷。 （二）试剂 1. 分离介质：含 0.33 mol/L 山梨醇， 50 mmol/L Tris-HCl （或 Tricine ） pH7.6 ， 5 mmol/L MgCl 2 , 10 mmol ...

植物生理实验使用的材料非常广泛，根据来源可划分为天然的植物材料（如植物幼苗、根、茎、叶、花等器官或组织等）和人工培养、选育的植物材料（如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织、酵母等）两大类；按其水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料（如苹果、梨、桃果肉，蔬菜叶片，绿豆、豌豆芽下胚轴，麦芽、谷芽，鳞茎、花椰菜等）和干材料（小麦面粉，玉米粉，大豆粉，根、茎、叶干粉，干酵母等）两大类，因实验目的和条件不同，而加以选择。 植物材料 ...

植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。 一、原理 氯化三苯基四氮唑（ TTC ）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （ TTF ），如下式： 生成的三苯甲 （ TTF ）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡 ...

植物细胞的渗透势主要取决于液泡的溶质浓度，因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗逆性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸水能力，而在一定程度上维持细胞膨压，保障细胞的生长和气孔的开放，这种现象叫做渗透调节作用。渗透调节能力的大小可以用逆境条件下细胞的渗透势的降低值来表示，在水分生理与抗逆性生理研究中经常需要测定。 一、原理 将植物组织放入一系列不同浓度的 ...

1) wash 10' with tap H2O 2) wash w/ 4xV w/ 0.2% AgNO3 3) wash 2x w/ sterile H2O 4) wash 1x w/ 100mM NaCl 5) wash 3x w/ sterile H2O 6) plate w/ 100ug/ml chloramphenicol 100U/ml Nystatin OR 1) wash 1' 96% EtOH, aspirate 2) wash 10' 30% commercial bleach w/ 1ul/ml 20% TritonX100 3) wash 5x w/ sterile H2O 4) plate as above 上一篇：叶绿体色素的提取、分离和理化性质 下一篇：Pr ...

一、原理 叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素 a 、叶绿素 b 、胡萝卜素和叶黄素组成。它们与类囊体膜相结合成为色素蛋白复合体。这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。提取液可用色谱分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。 当叶绿素 ...

1. Transform plants by infiltration, grow to seed (F1). Transgenes should be dominant (expressed constitutively), therefore phenotypes possible in these seeds although there are so relatively few transformants that they would be virtually impossible to see. 2. Plate F1 seeds on KAN and sel ...