蛋白分离纯化

一、材料与方法 1. EDTA（无蛋白酶抑制剂）（Roche） 2. 毛地黄皂苷（EMDChemicals） 3. 蛋白酶抑制剂（DMSO，leupeptin，pepstatin）（Sigma） 4. BECKMAN离心管（BECKMAN） 5. ANTI-FlagM2亲和树脂（S ...

一、材料与方法 1. EDTA（无蛋白酶抑制剂）（Roche） 2. 酸冲洗过的425-600玻璃珠（Sigma） 3. 洋地黄皂苷（digitonin）（EMDChemicals） 4. 蛋白酶抑制剂（DMSO亮肽素胃蛋白酶抑制剂）（Sigma） 5. BECKMAN1.5 ml ...

材料 琼脂糖凝胶介质镍亲和柱 紫外检测仪 蛋白电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件 5 ml 注射器 0.45 μm 滤器 超声破碎仪 试剂 1. 结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，10 mM 咪唑，pH=8.0 2. 洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，不同梯度浓度的咪唑，pH ...

基本原理 分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。 TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解 ...

反相色谱（reversed phasc chromatography RPC）是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高，在高效液相色谱中这是应用面最广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性 ...

【实验目的】1．学习亲和层析的原理。2．掌握亲和层析法分离蛋白质的技术与操作。【实验原理】亲和层析是以普通凝胶作载体，连接上金属离子制成螯合吸附剂，用于分离纯化蛋白质，这样的方法称为金属螯合亲和层析。蛋白质对金属离子具有亲和力是这种方法的理论依据。已知蛋白质中的组氨酸和半胱氨酸残基在接近中性的水溶液中能与镍或铜离子形成比较稳定的络合物，因此，连接上镍或铜离子的载体凝胶可以选择性地吸附含咪唑基和巯基 ...

一、原理 1.葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。（G-200能分离800-80000D分子量的蛋白质） 2.利用离子交换法，选取DEAE-阴离子纤维素DE52柱材料，因为PPO是带有阳离子的蛋白质，在层析时会吸附在柱材料上，而杂蛋白会洗下。后用NaC ...

一、原理与方法 PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。 其方法是：在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓冲液试管中加入0.05ml0.05M邻苯二酚溶液，在3 ...

（一）原理 凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽，所需时间也短，但其凝胶过滤后样品体积较大。所以，要根据具体情况选择使用。前 ...

1. 蛋白沉淀 蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸，在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或者特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。硫酸铵是沉淀蛋白最常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保持目的蛋白的活性。硫酸铵分馏常用作试验室蛋白纯化的第一步，它可以初步粗提蛋白质，去除非蛋白成分。蛋白质在硫酸铵沉淀中较稳定，可以短期在这种状态下保存中间产物，当前蛋白质纯化多采用这种办法进 ...

演示重组细胞渗透蛋白的表达和纯化过程，我们也通过细胞培养法评估了重组Cre蛋白的细胞内重组酶活性。

蛋白质胶内酶解 从二维凝胶电泳到基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI―TOF―MS)需要有一个胶后处理系统，包括凝胶的图像扫描和分析、蛋白质斑点切割、酶解和MALDI靶上点样等步骤，其自动化程度的高低是蛋白质组研究能否达到高通量、高灵敏度和高准确性的关键步骤之一。 快速银染的蛋白质点进行胶上酶解的主要步骤如下。 (1)清洗和脱色：将蛋白质点用Ettan切胶仪(A ...

本文主要介绍了分离蛋白过程中的一些试剂。

本文主要介绍了蛋白质浓缩的分析方法和制备方法。

以下是“Q hyperCel”和“S hyperCel”两个应用实例： 1、“Q hyperCel”用于E.Coli裂解液rGFP的预纯化；2、“S hyperCel”用于纯化mAb抗体第二步环节。

前言： NusA融合蛋白表达系统于9年前（1999年）由Davis发明，并在2000年由Novagen首先进行商业化设计和开发，特别推荐用于以NusA作为N端标签时提高在大肠杆菌中难溶的重组表达蛋白的可溶性。NusA融合蛋白表达系统面市至今，已经通过一些高通量表达筛选的评估确认其在可溶性改善方面的有效性。关于NusA融合表达蛋白去除或不去除NusA标签，目的蛋白仍然具有活性的报道也有很多。正是由于 ...

若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。

各种蛋白质分子上可能带有不同的电性，经过离子交换管柱，可依其分子带电性的差异而分离开来。

不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离

包涵体是外源基因在原核细胞中表达时，尤其在大肠杆菌中高效表达时，形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒，在显微镜下观察时为高折射区，与胞质中其他成分有明显区别。