蛋白表达

近来看到好多“熟悉”的问题，不断的被询问。猜测是因为丁香园不断的壮大，好多新的战友不断加入。但是可能大家一时并没有养成搜索的好习惯，于是许多问题不断的被翻出。其中蛋白表达问题是问的最多的，虽然关于这个问题的帖子园子里是汗牛充栋了。建议大家在询问之前能养成搜索的好习惯，毕竟高手们并不是时时都在的。在这里我把关于蛋白表达问题做一个总结。这里的帖子都是含有加分的回答，很有参考价值。普通的帖子没有整理。一、原核蛋白表达问 ...

这是园子里各位战友的经验或者困惑，希望对大家在研究和工作中有一定的帮助。蛋白表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/109985蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/thread/518317原核表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/111135基础表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/218210蛋白表达http://www.dxy.cn/bbs/t ...

喜欢转贴的，请注明来自中国生命科学第一网：丁香园。根据自己体会和蛋白版的既往精华帖子，总结了没有发现蛋白质表达的原因，或者蛋白质不表达的原因，欢迎大家拍砖。1.载体构建错误。 这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特 ...

原核表达研究者关心的10个问题 (3)pET 是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。经pET系统过与使用过和正在使用这个系统的科学家的交流，我们发现了一些在使用pET系统的过程中以及原核表达中的一些常见问题。在此，我们选取了其中一些比较有代表性的问题，附上我们的建议改进方案，并期待和你一起分享成功的喜悦。7. 如果IPTG诱导后细胞停止了生长，是不是表示细胞死了？T7 RNA聚合酶 ...

以下为有关于gst的帖子，供大家参阅：大肠杆菌表达的GST和人的GST有同源性么http://www.dxy.cn/bbs/thread/402809如何去除GST融合蛋白以外的GST的表达？http://www.dxy.cn/bbs/thread/711228请教GST蛋白的纯化http://www.dxy.cn/bbs/thread/585739GST pull downhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/496 ...

最近2个月一直在研究studier的auto-induction Protein Expression System.他今天三月份在Protein expression and purification上发表了一篇长达28页的文章“Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures。 Protein Expression and Purification 41 (2005) 207–234” 综述了3 ...

不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大 ...

Transformation of plasmid DNA to competent E. coli cellsTransformation is the process of getting the recombinant vector from a reaction mixture or vector solution into E. coli cells. To enable the cells to take up circular vector DNA they have to be made competent. The method for the preparation of co ...

原核表达标准　　目前世界上， pET 系统已成为在大肠杆菌中蛋白表达的首选。该系统成功的一个主要原因是目标基因被克隆到不为大肠杆菌 RNA 聚合酶识别的 T7 启动子之下，因此在加入 T7 RNA 聚合酶之前几乎没有表达发生。克隆到 pET 载体的基因实际上是被关闭的，不会由于产生的蛋白对细胞有毒性而引起质粒不稳定。重组质粒转移到染色体上含有一拷贝由 lacUV5 控制的 T7 RNA 聚合酶基因的表达宿主中，并通过加入 IPTG 诱导表达；也可通过 l CE6 感染原始克隆宿主菌来提供 T7 RNA 聚 ...

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因——即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的影响，是勿庸置疑的。 ...

翻译调控——连接基因组学和蛋白质组学的有效手段摘要：在细胞内，蛋白质水平和mRNA水平是不一致吻合的。对蛋白质合成的 调控不仅局限于转录过程，翻译阶段也有一部分调节作用，mRNA的水平不能完全代表蛋白质水平。应用蛋白质双向电泳等方法分离蛋白质存在许多缺点，因此，利用蔗糖密度梯度离心的方法研究在翻译过程中的蛋白质调控是有意义的。只有核糖体结合的mRNA才可以翻译成蛋白质，而游离的mRNA在翻译中不起作用。关键词 翻译调控 ...

我在两处看到GST-融合蛋白表达的方法有些困惑（主要集中在前几步）希望大家讨论。1、 1）将带外源DNA的pGEX载体转化入感受态，LB/Amp生长12-15hr。2）挑克隆于2mlLB/Amp中3-5hr3）加入100mmol/L IPTG至终浓度0.1mmol/L诱导表达，继续3-5hr4）。。。5）。。。2、1）On the first day, transform E. coli strain DH5α with the pGEX2TK–ER fusion expression ve ...

原核表达常见问题解答2004-2-25原核表达研究者关心的10个问题pET系统是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。经过与使用过和正在使用这个系统的科学家的交流，我们发现了一些在使用pET系统的过程中以及原核表达中的一些常见问题。在此，我们选取了其中一些比较有代表性的问题，附上我们的建议改进方案，并期待和你一起分享成功的喜悦。1.目的蛋白总是以不可溶的形式出现真是 ...

温度诱导型原核表达载体pBV220工作原理及全序列实验原理PLPR启动子是大肠杆菌l噬菌体中控制早期转录的启动子，具有极强的起始RNA转录的功能，基因工程中常用它来构建高效表达载体，它受抑制物CI蛋白的负调控。在实际中CI蛋白被改造成温度敏感型(CIts)，由DNA片段CIts857（857bp长）编码。CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活而失去抑制启动子的活性，因此，改变工程菌的培养温度即可 ...

Heterologous Proteins Expressed in Pichia pastoris来自：http://faculty.kgi.edu/cregg/Pichia2004.htm有以下几部分组成：Protein CommentsMode, amount,signal sequenceReferences and Links分别分物种来源如下：BacteriaAlpha galactosidaseS453Bacillus licheniform ...

尿嘧啶糖苷酶的表达与纯化做完taq酶的表达与纯化接着就做ung酶的表达与纯化，虽然刚刚做完taq酶的表达，但还是花了两个星期才做好ung酶的表达与纯化，把实验中的心得写出来，希望对大家有所帮助。1：蛋白表达的实验前准备，确认原材料的来源与实验用水的洁净度，认真的配好每一种试剂，设计好实验方案。2：上NCBI查找基因序列，确认ung酶基因在大肠杆菌K12菌株基因组的58.4min。总长度为690bp，所表达蛋白大 ...

Hi guys,I have a question for you. I made a construct which had beensequenced. It is in pcDNA3.1(+) and with HA-TAA to stop. The rightsize for endogenous protein is 31kD. But when I transfected into COS-7and run western, the size always is 48kD. The endogenous protein isround 33kD (invitrogen protein ladd ...

信息1、Recombinant Gene Expression : Reviews and ProtocolsEditor(s): Paulina Balbás1, Argelia Lorence2Affiliation(s): (1),Centro de Investigación en Biotecnología,CuernavacaMéxico(2)Virginia Polytechnic Institute,State University,BlacksburgVASeri ...

偶然发现的一个pQE30系统表达蛋白纯化案例，帖出来和大家分享。Purification of LF.诱导与表达E. coli SG13009(pREP4) carrying the recombinant plasmid pPG-LF1 was grown at 37°C in Luria broth with 100 μg of ampicillin and 25 μg of kanamycin per ml at 250 rpm.When the A600 reached 1.0, isopropyl-1-thio-β-d-galactopyran ...

最近很郁闷,非常郁闷!!!明天就要去考博了,现在实验出现这种奇怪的事,郁闷啊!大家别急,我详细的说说我遇到的问题.一直在表达纯化蛋白.一共两种,都是一起做的.其中有一个没什么问题,顺顺利利.没什么好说的.现在说说另一个.这个问题蛋白呢,基因是我们实验室自己克隆的,genebank登录号AF188239.338个氨基酸.预测有两个跨膜域.其中这个蛋白有19个半胱氨酸残基!!!!!!(这是我后面发现有问题,自己一个一个去对发现有 ...