PCR引物设计

我合成了好几对引物都因为产物的GC含量极高达74%,都没有成功,我又合成了一对引物,没有加酶切位点,想如果能P 出来就回收做摸板,大家请帮我看看,引物设计可行吗?上游引物:5-ATGGCGGGCGTCTGCTCTCCACCTG-3下游引物:5-CCACCTTGAAGTCATTCTCCAGGCGGC-3如果 不行,请大家帮我设计一下引物,感激不尽!我已经做了快半年了.郁闷啊!产物序列:1 tgcagcggtt ctggatggcg tta ...

PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA ...

求助 帮设计引物求助 哪为高手帮我设计一下以下序列引物 要求 长度大于等于20bp 上游引物最好在1－100 下游1449－2046 不需要酶切位点 谢谢ggctccgcagagtgaccctttttcttggaaaagcggtggcgagagaagtgaaggtggctgttgggtagggagtcaagactcctggaaggtggagagggtggcgggaggatgagctcgccgggcacagagagcgcagggaa ...

我打算用人的heme oxygenase-1cDNA做目的基因做基因治疗.用RT-PCR从mRNA得到我的目的基因.heme oxygenase-1基因序列如下:1 tcaacgcctg cctcccctcg agcgtcctca gcgcagccgc cgcccgcgga gccagcacga61 acgagcccag caccggccgg atggagcgtc cgcaacccga cagcatgccc caggatttgt121 cagaggccct gaag ...

我要做RT-PCR，其基因的mRNA序列为:CDS 1..7671ORIGIN1 atgccgccgc tcctggcgcc cctgctctgc ctggcgctgc tgcccgcgct cgccgcacga61 ggcccgcgat gctcccagcc cggtgagacc tgcctgaatg gcgggaagtg tgaagcggcc121 aatggcacgg aggcctgcgt ctgtggcggg gccttcgtgg gcccgcgatg ccaggac ...

这是本人关于分子生物学的一些基本技术方面的收藏,将陆续放上来,大家跟据自己情况取舍.如与以前有重复的,敬请谅解.PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Pri ...

PCR Primer Design (Methods in Molecular Biology)By Anton YuryevPublisher: Humana PressNumber Of Pages: 431Publication Date: 2007-08-02ISBN-10 / ASIN: 158829725XISBN-13 / EAN: 9781588297259Binding: HardcoverIn the past decade, molecular biology has been transformed from ...

希望各位大侠帮忙设计下CASPASE-3的REAL TIME PCR引物。以下是序列：1 atggacaaca acgaaacctc cgtggattca aaatccatta ataattttga aacaaagact61 atccatggaa gcaagtcgat ggactctgga atatatctgg acagcagtta caaaatggat121 taccctgaaa tgggcttgtg tataataatt aataataaga acttccataa aagc ...

设计的引物TM在60度左右，最重要是扩增片段要在340-355bp,谢了先FEATURES Location/Qualifierssource 1..939/organism="Mus musculus"/mol_type="mRNA"/db_xref="taxon:10090"/chromosome="3"/map="3 19.2 cM"gene 1..939/gene="Il2"/note="synonym: Il-2"/db_xref="GeneID:16183"/ ...

请大家帮忙，初次接触PCR,可能问题很菜。文献提供的TF的引物为：forward, 5-CACTCATCATTGTGGGAGCAGTG-3reverse,5-CGCGACGGGGTGTTCTT-3请问１：我如何知道这对引物所对应的位点？用何方法或软件？请详细告知？我自己试了试，对不上号:(　　２．这对引物在多篇英文文献中做Real-Time RT-PCR时使用，如果我做半定量RT-PCR,可以使用吗？需要做何修改？TF的mRNA在G ...

我是临床医生，作试验是新手，在普通PCR时就一直扩不出目的片段，很苦恼，向高手请教，以下是相关内容目标基因：NM_181755.1 GI:32455238ORIGIN：1 ggaggaggga gagagagaga agagaagaaa aagaaaaaag aacatcaata aaaagaagtc61 agatttgttc gaaatcttga ggagtcttca ggccagctcc ctgtcggatg gcttttatga121 aaaaatatct c ...

PCR--------------------------------------------------------------------------------Optimal Annealing Temperature: 54.0° (Max: 70.9°)--------------------------------------------------------------------Position Length Tm GC P.E.#--------------------------------------------------------------------Product ----- 261 83.8 44.8 44.8Upper Primer 708 21 67.9 47.6 6 ...

刚准备作RT-RCR， 自己设计了一个引物，烦劳各位专家指点评价mmp-2 rat基因编码1 cgggtggacc ccagggcact gccacgacct cagggtgaca cgcggagccc gggagcgcaa61 ggatggaggc acgattggtc tggggagtgc tcgtcggacc tctcagggtt ctctgcgtcc121 tgtgctgcct gctgggccag gtggacccca gggcactgcc acgacctcag ggt ...

引物设计时3’端末位碱基的问题，有多种版本：1、《PCR Cloning protocols》P20： Primers should end (3') in a G or C, or CG or GC，this prevents “breathing” of ends and increases efficiency of priming。2、《分子克隆》第3版P608：如果可能的话，每个引物的3‘端碱基应为C或G，但不推荐使用――NNGC或NNCG，引物末端碱基GC高的自由能可促进发夹结构的形成，还可产生引物二聚 ...

1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。3.引物GC含量 ...

小妹从文献上找了一对引物，各种条件几乎都摸了，都出现二聚体，P不出来，请各路大哥指点迷津，引物是否可用。引物序列如下上游序列：5’-TGA CCC ACT TGC CAC CCG TGC-3’ 下游序列：5’-GCA GCA CCC CAG GGC TGG C-3’酶切位点为825，,PCR产物268bp。基因序列为 1 ccacaatagg ggcagacctg tccatccttc tctgtgggtc ccctgtacct ttctccccca61 acaggatcag acccagaggc agc ...

基因序列如下：1 ctcctg gtgcaatgga gcgagtatta aaggtctttc attattttga aagcaatagtgagccaacca ccgaccactgtg agcccgcggc gtgaggcgtg ggaggaagcg cggctgctgtcgcccagcgc61 cgccccgtcg tcgtctgcct tcgcttcacg gcgccgagcc gcggtccgaa gtcttgctgt121 gtcacccagg ctgccagg ...

我想要的是大鼠GAPDH的一对引物，做内参用。blast出来那么多similar，能用吗？引物序列AGTTCAACGGCACAGTCAAGGantiCGCCAGTAGACTCCACGACATSequences producing significant alignments: (bits) Valuegi|22857817|gb|AC122039.4| Mus musculus BAC clone RP24-432H... 44 0.013gi|38089166 ...

高手来了啊 欢迎 多谢 帮忙看下我的这3条引物， 想选2 条。将用的是3‘RACE法 扩未知序列用的PRIMER 5 刚入门， 希望得到大家的帮助 给点意见 哪2条好呢？还是有什么缺陷， 要另设计？谢先了啊我的引物5' GTGAGAAGTTCCGTTATGC 3' seq no 67 ,length 19, Tm 50 ,GC%47.45' CGAGGAGGGAGAGGAAGAATAAACG 3' seq no 209,length 25, Tm 66 ,GC%525' CACGAACCACCAAAAAAACCCAACC 3' seq no 241 ,leng ...

最近在做一批细胞，打算要做PCR，因此引物设计这关逃不过了。beta 2 (TGFB2)、TGF A、VEGFC、VEGI各位同仁，我通过向两个老师请教设计了两套引物，方法如下。待各位同仁哪一种方法比较好。引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。设计原则：引物与模板的序列要紧密互补。引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引 ...