其他PCR技术

SNP(Single nucleotide polymorphism) 即单核苷酸多态性， 指的是由单个核苷酸—A,T,C或G的改变而引起的DNA序列的改变，造成染色体基因组的多样性。所以，SNP可导致人类疾病，如癌症、传染性疾病、自身免疫性疾病等，SNP是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据，因此被广泛用于群体遗传学研究和疾病相关基因的研究，在药物基因组学、诊断学和生物医学研究中起重要作用。 分类： 根据 SNP 所处的位置，可将 SNP 分为蛋 ...

本版块发帖量实在太多，因此分2个帖（上中旬和中下旬）分别帖出0应助贴，望大家积极响应，呵呵，有点浩如烟海的感觉哦http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3091491&sty=1&tpg=34&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3085000&sty=1&tpg=35&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?b ...

看到论坛里还是有同学请教克隆的问题，因为在以前的实验室里也经常做克隆，就整理了自己的一点经验，发在这里，希望能抛砖引玉，大家踊跃来讨论。实验的过程和标准过程差不多，只不过有些改进，缩短了一些步骤的时长。实验室常讲的克隆，意思是将一段序列连接到细菌（一般是大肠杆菌）的DNA中，随着大肠杆菌的不断繁殖，而达到使目标序列无限复制的目的。明确概念后，要讲讲克隆在实验室中到底有什么作用。最常见的是：1.要测序的PCR产物条带 ...

Cleavage Efficiency Close to the Termini of PCR FragmentsWhen designing PCR experiments in which the synthesized DNA fragment is to be subsequently digested with a restricton endonuclease, it is very important to determine how many extra nucleotides should be added to the 5'-end of the PCR pr ...

PCR条件对反应的影响变性温度与时间模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃20-30秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活性，最高变性温度不宜超过95℃。退火温度与时间退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强， ...

我最近跑pcr,用我的模板第一次跑出来，可后来始终不见条带。我的目的片断序列如下：ORIGIN1 accgcctccc gcaaagactt caccccaaag ctggggcgca ccccttgcac gccaccctcc61 ccccagcctg cttcttgagt cccccgcatc ccaggaccct ctctcctctg ggaggccgat121 ctccctcgga cctgctggca atagcttcct atttaagaac acccca ...

全血基因组提取过程包括：1 、裂解红细胞并沉淀白细胞。2 、裂解白细胞及其细胞核。3 、盐析沉淀蛋白，分离基因组。4 、异丙醇沉淀脱盐并浓缩。5 、70%乙醇清洗，晾干并用TE缓冲液溶解。本试剂提取的基因组DNA长度大于20kb, 可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。一、 试剂盒组成 （本试剂盒提供的试剂组分, 至少可提取20份300ul全血样本的，每种组分均有足够的富余量）1． 红细胞裂解液：20ml/1瓶。 4. TE 缓冲液（DNA溶解液）：4ml/1瓶。2． 细胞 ...

就小量RNA的检测而言，与传统的RNA定量检测手段（如RNA印迹分析）相比，逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)更为灵敏。实际上，这一技术足以定量单细胞的RNA水平。qRT-PCR应用的主要限制因素是结果的高不稳定性，这源于实验所用生物系统的不同，RNA提取方式的多样化以及逆转录反应和PCR效率的差异。 所有这些变量都使得实时定量PCR结果难以进行标准化处理。用于量化qRT-PCR结果的策略不止一种。其中的一种方法 ...

碱裂解法抽提质粒原理碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M醋酸钾 / 2 M醋酸。让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液，是再自然不过的了。那么50mM葡 ...

一个PCR相关的专业网站，内容很全http://www.pcrlinks.com/实验方法与步骤详解http://swjsx.ntmc.edu.cn/Protocol/home.htm美国AXYgen公司http://www.axygen.com/NewFiles/pcr.htmlhttp://www.alkami.com/This 158 page PCR manual covers the following topicsPCR Primer designPCR M ...

不会释放气体的安全制冷剂：干冰型冰袋问世干冰被广泛应用于－0℃以下温度保存要求的生物、食品的配送与保存。但是, 由于干冰在使用过程中会产生800自己体积的二氧化碳气体，存在爆炸的安全隐患，各个航空公司已经明令禁止使用作为干冰制冷剂。此外，干冰采购、储存与使用十分不方便，价格也比较高，买回来的干冰必须马上使用掉，否则很快就会挥发掉，这大大增加了配送成本。然而，由于没有合适的替代产品来保证少量货物低温配送过程中的低温，干冰 ...

深圳菲鹏生物股份有限公司位于国际化大都市——深圳，是一家以技术创新为核心竞争力的新兴高科技产业生物公司。深圳市菲鹏生物股份有限公司成立于2001年的8月，是大陆乃至亚洲地区最大免疫诊断产品的原料提供商。目前菲鹏生物的产品不仅在国内占有相当大的市场份额，同时还成功进入北美、欧洲等西方发达国家市场。菲鹏生物以研发为立足之本，公司从资金投入、人才引进、福利待遇等各方面保证研发的高速进行。公司每年拿出销售的10％进行产 ...

一、PCR技术及步骤 聚合酶链式反应（PCR） PCR扩增产物的克隆 上述两个实验包含基本原理、步骤、问题等。二、PCR常见问题汇总1. 没有得到扩增产物 （1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 （2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。 （3）变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过 ...

结核杆菌可以导致全身性疾病，特别是在发展中国家，其发病率较高，危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大，对抗痨药物的耐药性增加，从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断，但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接种虽特异性较高，但因时间较长，不能满足临床快速诊断的需要.近几年也出现了几种快速诊断方法，但也存在较大的缺陷，如短期培养后抗原免疫原性分析，即用放免 ...

基因扩增仪器名称 生产厂商 型号 规格 参考报价 销售单位DNA扩增仪 德国BIOMETRA UNO 可配原位PCR USD5,900 华粤企业公司/华耀贸易有限公司DNA扩增仪 美国STRATAGENE RoboCycler 40 四槽结构 USD8,500 冷泉港生物科技有限公司DNA扩增仪 美国TE CHNE 　 　 　 美国NBS公司上海技术服务中心DNA扩增仪(梯度型) 美国STRATAGENE GRADIENT 40 四槽结构 USD9,800 冷泉港生物科技有限公司PCR Stratagene RoboCy ...

LOCUS NM_017002 1524 bp mRNA linear ROD 28-OCT-2004DEFINITION Rattus norvegicus erythropoietin receptor (Epor), mRNA.ACCESSION NM_017002VERSION NM_017002.1 GI:8393318KEYWORDS .SOURCE Rattus norvegicus (Norway rat)ORGANISM Rattus norvegicusEukaryota; Meta ...

测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板，合成出准确互 ...

In 1972, two groups, working independently, developed a new method to clone fragments of DNA using the enzyme terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT). Because the use of restriction enzymes for cloning purposes had not yet caught on, these two groups had developed their methodologies ...

我是一个今年刚考上基础医学院研究生的同学，也是丁香园里的新成员。资源中大家共享的帖子我觉得挺好的，就整理了一下，方便更多同学查阅学习。下面是2004年2月14日－2006年6月12日得到版主加分的共享或有价值的帖子。1 【分享】呵呵,俺自己操刀整理的一些东西。分享给需要的战友吧，请自由传播!http://www.dxy.cn/bbs/thread/61104782 【整理】★ ★ ★ PCR讨论版建版以来部分精华贴汇总★ ★ ★http://www. ...

前几天看到loveyingzi 在PCR技术讨论版有一个旧贴子。 我是一名普通的兽医(E-mail: ydfyfdquam@163.com)，了解过一点附红细胞体。首先，loveyingzi选择研究的兔作为附红细胞体的研究动物，可能不妥。虽然我国于1981年晋希民教授就发现了家兔的附红细胞体，可是那毕竟是形态学的观测。随着最近十几年的分子生物学的发现，很多学者都以16SrRNA的基因序列来作为原核生物的鉴定基因，并且国内外的 ...