PCR运用

临床拭子标本DNA PCR反应模板的制备 此方法适用于各种拭子标本（鼻、咽、口腔和生殖道等）中DNA的快速制备。 【试剂与配制】PBS-2×Fungi-Bact液钾缓冲液：50mmol/L KCl10～20mmol/L Tris-Cl，2.5mmol/L MgCl(pH8.3)，1%laureth12，0.5% Tween-20，蛋白酶K（100μg/ml） 生理盐水无水乙醇T ...

为了探讨HBV未分离成功的情况下研究HBV父儿传播途径的可行方法。方法：以巢式PCR检测HBV DNA与序列分析的方法比较父亲与胎儿所携HBV S区nt451-660段，C区nt2022-2321段序列的一致性。

本文介绍的是一个通过DNA提取、纯化以及PCR扩增来对大豆中外源性 DNA 序列进行检测的方法。从少量的大豆粉中提取并纯化DNA,利用不同的特异性引物进行PCR反应，再通过电泳结果来决定样品中是否有转基因成分。实验的主要目的是熟悉一些常规技术，如DNA提取与纯化，以及PCR技术的理论和应用。

寻找差异表达的基因有不少方法，抑制消减杂交（SSH）是比较有效的一种方法。以Clontech的PCR-Select cDNA Subtraction Kit为例：将样品（tester）和对照（driver）的mRNA分别反转录并合成为双链cDNA后进行酶消化；样品（tester）分为两组，分别加上不同的adaptor1/2；再将两组样品（tester）分别与过量的对照（driver）杂交，两份杂交结果混合，加入过量的对照再进行第二轮杂交；补齐adaptor然后用PCR选择性扩增。

聚合酶链式反应（PCR）详细步骤

1.Two rounds of DNA synthesis to incorporate fixed sequences Prepare the following: Reaction tube containing the following: 7ml DNA to be amplified and labelled 2ml 5X T7 Sequenase Buffer 1ml 50mM Pim ...

基因芯片技术具有快速多样、微型化和自动化等特点在生物医学领域广泛的应用。但由于其基本原理是基于核酸杂交技术，有着内在的缺陷，实验的敏感性和重复性都存在一定问题。核酸杂交较适合于检测基因的表达，不易检测基因组DNA的基因的重排，突变和缺失。而大多数肿瘤性疾病和一些遗传变异和表型的改变与后者有关。为了解决上述问题，我们将芯片技术与荧光PCR技术相结合，设立设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，以期 ...

多聚集链反应（polymerasechainreactionPCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。 1 实时荧光定量PCR ...

PCR除了是一个诊断工具外，更重要的是它有广泛的运用。PCR本身可直接用来鉴定特定基因的存在与否，也可以用来侦测基因是否有异常 (Gene mutation deletion and rearrangement…)。例如，在医学上对遗传疾病或肿瘤癌症的诊断及预后的评估； 对细菌、病毒及霉菌感染的诊断。它也可成为一个生产线进而大量复制特定的基因进行基因密码的读取 (DNA sequen ...

1、在骨肿瘤发病机理研究中的应用 骨恶性肿瘤是多种癌基因多阶段多途径协同作用的结果，到目前为止，发现与骨恶性肿瘤密切相关的癌基因有K-ras、c-fos、proα-1、proα-2、c-sis、c-raf、 c-myc、met、mdm2，抗癌基因有Rb、P53、P16等。发现的癌基因已有100多个，抗癌基 因有8个，它们当中究竟还有哪些与骨恶性肿瘤发生发展有关，仍有待于进一 ...

骨肿瘤诊断需要解剖学、组织学和胚胎学等基础知识，对病变需认真观察，仔细分析，但更重要的是对临床资料及X线所见要特别重视。骨肿瘤形态变异较大，而临床X线观察较全面，病理镜检有一定局限性，而一些癌基因改变是与某一型骨肿瘤密切 相关，即为肿瘤特异性基因，因此在骨肿瘤诊断方面在坚持临床、X线及病理三结合 的诊断原则基础上，通过PCR技术对肿瘤特异性癌基因变化的检测，可以更好地辅助骨肿瘤的诊断，具有其它方法 ...

癌症为基因突变造成的疾病，是由于细胞生长、分化及分裂繁殖等有关的基因产生病变所造成的。这些基因包括促进细胞分裂及繁殖的致癌基因，抑制细胞分类及繁殖或促进细胞分化的抑癌基因。当致癌基因过度活化或抑癌基因不活化而使细胞分类繁殖不受控制时，细胞就渐渐进入癌化的过程。因此癌细胞常包括有多个基因的突变，而不同的癌症又有不同的基因病变。如慢性骨髓性白血病会产生BCR-ABL的病变基因；又如以消化系肿瘤而言，大 ...

real-timeimmuno-PCR1992年，Sano等人将免疫测定技术与PCR结合，创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术，即免疫-PCR（Immuno-PCR），随着这种技术的不断发展，2000年，Sim等使用荧光定量PCR代替普通PCR，发展了免疫定量PCR技术（real-timeimmuno-PCR）。该技术把抗原抗体反应的高特异性和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来， ...

一、目的 了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。 二、原理 PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析，还可用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病诊断，肿 ...

1、PCR括增的基本原理 PCR (Polymerase Chain Reaction) 是体外高效复制DNA的技术，该技术几乎贯穿于现在分子生物学的各个领域。PCR体系由模板，特异性引物，高温聚合酶，脱氧核糖核酸几部分组成。反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing）引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退 ...

We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Primer Designed dsRNA). It is also possible to produce dsRNA u ...

(1) Core out a single well separated plaque from the agar plate using a 200µl pipette tip and place it into 500µl of SM buffer in a 1.5ml microtube: SM buffer 5.8g of NaCl 2.0g of M ...

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