siRNA基础实验

wuyf 我想看转录因子sp1对我的目的基因的表达是不是有影响，我用sp1siRNA转染细胞，发现与对照细胞相比，细胞内总RNA量减少。sp1siRNA转染细胞大家有做过的吗？freecell 同样结果重复了几次么？做了几个剂量？每个剂量做了几个重复？ffyy8888 :D因为转染了一些东西进去，或多或少会对细胞状态有影响的，你只要将对照做全，就可以呀，怕啥，多做几组对照就可以了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

iceman340 本人现在实验，需要要用到MIFsiRNA用来干扰小鼠，请问各位高手，有谁做过这方面的实验，这个MIFsiRNA的用量是多少啊？？急求！！不胜感激iscience 你自己看看文献，不就知道了吗？再者说，你如果做这个试验，应该需要做不同梯度的siRNA吧？我告诉你，每只小鼠用0.01ng siRNA， 你相信吗？你就按照这个去做？iceman340 iscience wrote:你自己看看文献，不就知道了吗？再者说，你如果做这 ...

caroline0701 我最近要设计几对化学合成的siRNA,在网上看了一些资料，想请问一下siRNA的结果该怎么分析啊？Max score， Total score， Query coverage， E value， Max ident 都是什么意思？谢谢大家的指导！预祝大家国庆节快乐中秋快乐freecell 不同的算法有不同的评价参数。不给出具体信息，难以判断。caroline0701 Target sequence 24: AATCTTTGGAAGAACTACCA ...

huiguijimo 请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？在用该干扰链处理细胞时，培养细胞用的培养基也要用无血清的培养基吗？这样长时间（48小时或者更长时间）会对细胞造成损害吧。。。请问各位，用脂质体转染细胞时具体应该怎样操作？bio_vector huiguijimo wrote:请问采用脂质体转染siRNA干扰链时，为什么要用无血清的培养基因稀释干扰链？在用该干扰链处理细胞时，培养 ...

alterego 查阅了很多文献，结果把自己越搞越糊涂了因为是做阳离子的复合载体，主要是用PEI进行siRNA的静电吸附，PEI经过修饰之后，氨基有所变化，已经通过化学的比色法进行残余氨基测定，可以确定氨基残基（N）的mol数但是每个mol的21nt的双链siRNA（19对RNA，undefined2个嵌合DNA，很经典的搭配）中磷酸集团（P）应该算成几个mol呢？查阅了许多类似的siRNA文献，都没有正面说这个问题。DNA的东西貌 ...

baoyuanfei siRNA沉默基因时间短， 48小时后能测蛋白表达情况吗？freecell 一般24~72H内检测蛋白表达情况。baoyuanfei 嗯，看文献都是48h测蛋白，但是每个基因表达为蛋白的时间应该是不一样的，不知现在有没有好的方法测出这种时间？威斯腾 主要侧什么时间sszfbj 没问题zenghong808 一般都是48-72h检测的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可 ...

麻果果 我想对某一序列的基因进行沉默，在知道DNA 序列号的情况下，能否设计出针对mRNA的siRNA序列？是生物合成的还是化学合成的转染效率要好一些，用什么样的转染载体教实惠？lalala_2004 提交你的基因，找专门的公司搞定，他们有现成的siRNA库。威斯腾 有的文献是用化学合成的，这样比较快，但是都是瞬时转染，载体比较好的目前是病毒载体。可以和我联系，我的邮箱是sc-western@163.comzhujoker 其实si ...

zhang666fengg 急需Src siRNA干扰Src过程以及Src与NEDD4-1在胶质瘤信号转导方面的相关图片，谢谢doctormy Src siRNA干扰过程：Small interfering siRNA duplexes for Src was obtained from Dharmacon (Lafayette, CO). A scrambled sequence was used as a negative control. Transfection of siRNAswas performed ...

在设计siRNA时，人们总是关心如何地提高siRNA的效率，实际上我认为研究为什么siRNA没有效率也是一个很有意义的问题，它可以从反面给人们以启发。在思考这个问题的同时，我查到一篇文献，说是单链RNA也是可以激发RNAi途径的，这对我很新鲜，因为一直把dsRNA引发RNAi当作经典范式。文章认为，单链RNA和双链RNA都是只有一条链同RISC (rna induced silencing complex)相结合，所以其机理 ...

1. 影响基因阻断水平（Gene Knockdown Level）的因素在RNAi实验中，有许多因素影响目的基因表达的降低程度（例如:基因阻断），包括：•　转染效率•　目的基因转录效率•　蛋白稳定性•　选择特殊Stealth™RNA或者siRNA序列的效率　•　选择哺乳动物细胞系的生长特征当设计转染和RNAi实验时，需要考虑这些因素。如果需要更多的信息帮助您成功的进行RNAi实验，查阅标题为“Seven Steps Toward RNAi Success”的文献。随同 ...

siRNA构建siRNA 质粒载体的构建RNA 小片段可以通过化学合成或质粒载体转录获得。质粒载体的构建是将长约70bp的含有特定茎环以及终止信号的DNA分子插入到特定载体中，该DNA分子可以 在细胞中转录为含有特定发夹结构的RNA双链分子。这些发夹RNA分子在细胞中被切割为19-23nt的双链RNA小片段，从而起到抑制特定基因表达的作用。siRNA 质粒载体的优点与化学合成siRNA相比，siRNA 质粒载体有以下优点：1. ...

Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA, such as chemical synthesis, in vitro transcription, siRNA expression vectors, and PCR expression cassettes. Irrespective of which method one uses, the first step ...

原文见：http://www.ebiotrade.com/newsf/2003-12/B20031219174450.htmRNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，因 ...

http://www.uniklinikum-giessen.de/bio/rnai.html这一页提供了许多RNAi公司的链接，值得加分呀！RNAi Drug Discovery CompaniesAlnylam Pharmaceuticals RNAi drug developmentBenitec RNAi stable gene silencing in transgenic miceCenix BioScience RNAi for genome-wide screening ...

在siRNA序列设计时，将潜在的序列用BLAST进行同源序列搜索时，出来的结果好象总是存在和其它编码序列同源的序列，郁闷！是不是可以只看E值？还是只看score？这个问题好菜！ 我的目的序列是Human P-glycoprotein (MDR1）中的一个片断，请问出现以下的结果如何判断这个目的序列与其它编码序列不是同源的序列？下面是BLAST的结果： Score ESequences producing significant alignm ...

Version 1.5 of siRNA DNA Designer has been released. The following features have been added.1) BLAST Engine:A BLAST Engine is now included with siRNA DNA Designer 1.5 which permits desktop analysis for potential off-target hits.The Blast engine performs a search for off-target hits using the s ...

http://www.ambion.com/techlib/tb/tb_502.htmlPublished siRNA Target SequencesApril 2003 - The significant increase in the rate of publication of siRNA target sequences has made it difficult to maintain a comprehensive list of these sequences. Therefore, we will no longer be upda ...

1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA序列为了找到潜在靶位点，扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析，去除那些与其它基因明显同源的靶位点。如果可能，siRNA应根据mRNA低二级结构的区域设计。美国著名RNA产品公司Ambion提供网上在线设计工具，帮助您更快地完成这项工作。网址为：www.ambion.com/tec ...

第一作者之一的宋尔卫(Erwei Song)是我们熟知的，他是中山大学附二院的医生，现在哈佛大学医学院血液研究中心Judy Lieberman教授组进行博士后研究。他曾发表用尾静脉快速大剂量法向小鼠体内输注siRNA成功实现耐受抗Fas单抗诱导的暴发性肝坏死。http://www.nature.com/nbt/journal/v23/n6/abs/nbt1101.html;jsessionid=EFF86FD58B3B573 ...

下载方法：登陆 www.56.com注册邮箱后登陆在【共享资源beta】里输入 gtett123 即可Table of Contents1. Ribozyme- and siRNA-Mediated mRNA Degradaion: A General Introduction2. Combination of Chemical and Enzymatic RNA Synthesis3. Determination of Kinetic Parameters for Hammerhead and Hairpin Ribo ...