RNAi

非编码RNA（Non-coding RNA）是指不编码蛋白质的RNA，包括miRNA、lncRNA、circRNA、piRNA等。非编码RNA发挥功能的方式很多，可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种细胞活动，主要包括基因的激活和沉默，RNA的剪接、修饰和编辑，蛋白质的翻译等。1. miRNA：miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。每个miRN ...

自 1998 年 Fire 和 Mello 首次提出 RNAi(RNA interference，RNA 干扰) 概念以来，越来越多的人开始重视小 RNA 的研究，之后 RNAi 在基因功能的研究中也得到广泛应用。RNAi 是一种存在于真核生物中的转录后基因沉默现象，在生物进化过程中能够抵御病毒感染及防止基因组中由于逆转座子元件扩增引起的不稳定。在 miRNA(microRNA)、siRNA(small interfering RNA) 等小 RNA 的介导下，RNAi 能够特异性地调控 mRNA 基因在 ...

1. RNAi 介绍RNA 干扰（RNAi:RNA interference）是由诺贝尔生理学/医学奖得主 Andrew Z. Fire 和 Craig C. Mello（1）在线虫实验中发现的，2001 年 Elbashir 等人发现哺乳类的 siRNA 可以进行 RNAi 诱导。这个方法与常规方法相比更加简便，现在已经成为一种常用的抑制基因功能的方法，也属于研究工具之一。RNAi 是 21~23bp 的短链双链 RNA（siRNA:small interfering RNA）或者是长链双链 RNA（dsRNA: ...

随着 RNAi 现象的发现和研究到 microRNA 成为全球生物研究者关注的热点，与其相关的各种概念不断刷新我们的认识，siRNA、shRNA、microRNA、pre-miRNA、pri-miRNA、microRNA mimic、microRNA inhibitor 、agomir、antagomir，各种 RNA 让刚刚接触 RNAi 的人头昏脑涨，那么，现在让我带大家认识一下他们各自有什么特点，有什么关系。siRNA 是 dsRNA 在 Dicer 酶作用下裂解成 21- ...

hawk2003 RNA干扰：shRNA脂质体转染HuT102细胞，转染率特别低，低于10%，请问各位大侠有什么好的建议？有人推荐电转，对电转不太了解，也不知道哪实验室能做电转，请大家给个建议！谢谢！用慢病毒转染效果怎么样？zhujoker 推荐使用慢病毒干扰，不仅效果好，而且现在的认可度高。baby_susan 转染条件摸索过吗，转染试剂可以选择更换一下看看，实在不行要么直接用化学合成的siRNA 转染，要么慢病毒包装后转染ha ...

三叶虫 站友们，你们好：我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达（或表达减少）。由于从来没有做过这方面的实验，希望各位站友能简单给我们讲述这个过程，哪些是要请公司做的，哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。据个人了解：1，制备一种东西，能切除特定的基因。（如何制备？如何设置阳性和阴性对照？）2，这种东西作用于细胞。（使用什么方法？）3，检测细胞的基因是否有变化（设立通过PCR,WB等。）4，还有什么其他的方法， ...

wcqworld 请教各位老师：假设我想研究一类因子（配体）是如何作用于细胞膜上的两个受体并诱导细胞发生功能变化的，请问的是，构建完两个受体的RNAI载体，通过分组后转染，分别进行单一受体基因的抑制和两种基因的抑制，那么是否会获得好的效果，干扰只是影响新蛋白的合成，原来形成的在膜上的蛋白不是还存在，会存在多久？这样是不是不可行啊，长效表达载体构建后离体在在体试验分别要处理多长时间后才能进行效果检测啊！ylhuang ...

小pig 小弟小硕一名，老板没有课题，要我自己想，我后来查了文献跟老板说了想做RNA干扰的体外实验，后来再查但是siRNA的相关价格都已经好几千了，更不用说加上引物设计，试剂耗材等等那些了，所以想在这里问问做过的大哥大姐们，能说个大概费用。因为我怕老板没啥经费，那我只能尽快另找课题了。呜呜呜，谢谢了！freecell siRNA细胞培养及其耗材等等加起来没有个一两万，肯定不好玩。这样的老板，你读它作甚？小pig 厄，读的时候不 ...

yx4122004 对U87细胞，进行某基因的RNAi，效果非常差。U87细胞转染其他质粒则可以，不存在转染效率的问题。而同一序列转染其他细胞，效果可以。可能原因是什么？freecell 转染试剂在不同细胞系上转染效率有所差异，这很正常。这和细胞表面所负电荷等很多因素相关，非一言可概之。song333 RNAi target efficiency is quite different in different cell lines. If this target site d ...

zhl068 各位仁兄，小弟最近实验研究某基因在某种肿瘤中的表达情况，需要进行细胞系内RNAi，查阅文献，已经有人将该基因在别的器官的细胞系作过，那小弟在我要研究的细胞系中再做说明的问题能有意义吗，是否是重复实验，因实验数据将来要发SCI，特向各位求助，望赐教！！！先谢过了zhl068 freecell斑竹，谢谢你，但还是不太明白，能得出的结论无非也就是说这个基因在我要做的器官中是个癌基因或抑癌基因，和别人的结果一样，那 ...

zz73cxf 外行问，小干扰RNA能否建立质粒后转到哺乳动物体内？有没简明教程或文献？多谢观天 将miRNA克隆到shRNA表达载体,一般转染细胞；转动物，方法就是拿质粒直接注射到组织内，但转染效果不一，现在有很多改进的方法，搜搜就知道了。。zz73cxf 非常感谢，能否详细些？比如想转到动物肺血管内皮细胞，能否直接从静脉打进去？如何鉴定？观天 恐怕要看你要沉默的的基因是不是组织特异性的吧？！要整合到特定组织，没经验你问问专门做 ...

vonde 某基因体外实验做完了，是肿瘤相关基因，做了RNAi，和体外的细胞系侵袭和转移实验，但又没有体内动物模型，下歩实验该做什么啊？哪位能够给个指导啊？迷茫vonde 该基因表达的蛋白，配体尚不明确，这样的情况，一般能做什么样的研究阿？求助版内高人michaelmichael 用裸鼠做成瘤实验，观察对肿瘤生长的影响。如果RNAi的结果比较理想，你就要研究它的相关功能，靶基因，对细胞周期，增殖，转移以及侵袭的影响，可以到相关 ...

mayingsheng 我想给慢病毒转染的RNAi带上抗药性筛选靶位和生物素酶的基因，有公司说不能同时带上两个标签，我的问题是：1、能否同时带上两个标记？2、那家公司可以做到：既设计RNAi及构建慢病毒载体，并带上以上两个标记？谢谢版主freecell留言:"那家“和”哪家“是不同的指代名词。ztxia 这里面主要有一个基因大小的问题，慢病毒载体一般要少于4KB，最好在2KB以下。同时带这两个标签可能超出的这个范围.版主f ...

简繁 小鼠有三个串联的骨钙素（BGP，或OC）基因OG1、OG2、ORG，其中OG1和OG2在骨中表达，其基因序列高度同源但不完全一致，产物mRNA及蛋白亦稍有序列差别。但是看文献中的骨钙素mRNA 的RT-PCR检测，均不提引物根据哪个基因设计；蛋白水平的检测亦不区分BGP1和BGP2，市面的小鼠骨钙素放免或酶免试剂盒亦笼统一用。请教：我要做小鼠源成骨细胞的BGP RNAi，该以哪个基因为靶基因？随便选其中一个还是两个都照 ...

wanglinling 近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA)，已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水平进行RNAi，研究科学家更 ...

mengxiaoyong 小弟要在绵羊上做RNAi，不知人源，鼠源U6或H1启动子在绵羊体内是否有功能？哪位大侠知道呀？先谢了！实验室里有U6或H1启动子载体！Fasta921 mengxiaoyong wrote:小弟要在绵羊上做RNAi，不知人源，鼠源U6或H1启动子在绵羊体内是否有功能？哪位大侠知道呀？先谢了！实验室里有U6或H1启动子载体！shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子，如人源H1或鼠源U6启动子 ...

在RNAi过程中，siRNA会识别mRNA上的靶点区域，并引导AGO等多种蛋白在该区域组成一个沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC），在该区域的特殊位点将mRNA切开，造成mRNA降解，但这个靶点识别、切割及释放的具体过程及分子机制并不清晰。7月2日发布的Molecular Cell中，来自东京大学和第三军医大学的研究者利用单分子成像分析技术，成功地解析了RISC的工作过程。本项 ...

分享我刚找到的有关RNAi的资料，现附目录如下，希望对战友们有用，如果您觉得不错，烦劳顶一下，呵呵（共42个分卷压缩包）=========================================2002年世界十大科学成就之首.caj2006年生命科学的十大新闻.txtH1启动子siRNA载体的构建及应用.kdhmicRNA和siRNA基因调控技术研究进展.cajmiRNARNAi和siRNA.cajRNAi_DNA稳定表达载体的构建与应用.k ...

RNAi－－从理论到实践，再到诺贝尔医学和生理学奖RNAi早期研究RNAi（RNA interference）是一古老的机制，最初来源于1990年Napoli在牵牛花Napoli et al. Plant Cell, 1990和Cogoni在脉孢菌Cogoni C and Macino G. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997中的发现，即转基因的共抑制现象（consuppression）。早期认为基因共抑制是基因副突变的范畴，但是靶基因序列具有明显不同的特征 ...

1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.htmlhttp://katahdin.cshl.org:9331/RNAi/http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html2.RNAi目标序列的选取原则：（1）siRNAs with lower G/C content (35-55%) are more active ...