感受态细胞的转化

摘要： 本实验介绍了细菌的转化与平板筛选的原理及操作步骤。 实验原理 感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀 ...

摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒DNA转化大肠杆菌1实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基 ...

摘要： 有人提出 冻存后转化效率降低且这种方法不适合大质粒.以下转贴为coli感受态细胞制备方法具体方法请最好查阅文献. 摘要: 但有人提出 冻存后转化效率降低 且这种方法不适合大质粒.以下为转贴具体方法请最好查阅文献E.c ...

摘要： 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只有一个大肠杆菌也能检测出来整个过程只需要20分钟. 摘要: 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只 ...

摘要： 酵母高效转化的实验方法. 1、接种5ml液体YPAD或10ml SC30℃下振荡培养过夜.2、计数过夜培养物细胞密度以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液.3、置30℃200r/min振荡培养至2×1 ...

摘要： 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双抗生素对 ...

转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化频率（转化子数/每ug质粒DNA）＝转化子总数/质粒DNA加入量（ug） 下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下： 第一天，上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板（一般要48小时以上才能长出单 ...

一、感受态细胞的概念 重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。 所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外 ...

Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthopedic Oncology Fourth Military Medical Univer ...

酵母感受态细胞的制备 (1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜； (2)测定过夜培养物的OD600值为3.0～5.0之间； (3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2～0.4； (4)在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其OD600值达到0.6～1.0； (5)于室温1500g离心5 min ...

重组子可通过酶切进行鉴定，也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定，阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。 1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中，37℃摇 床培养过夜。 2. 次日取菌液 0.2-0.5ml，13000rpm×3min 离心，弃上清，加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿，震荡混匀， ...

1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物，轻轻吹打混匀，冰浴 30 min。 3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90 秒，立即放入冰浴中 2 min。 4. 加入 0.9ml SOC，于 37℃恒温摇床上 200rpm×1hr 温育。 5. 将菌液 4000rpm/min 离心 3min，留 200μ l 上清将菌体打散 ...

一、对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行)： 1. 在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的效率，加入100pg-10ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每100微升感受态细菌加入10微升连接产物。 2. 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放 ...

It is best to do a test ligation without insert if the background is low it would not be necessary to screen colonies for insert.1.colony PCR 1) Pick a colony from plate and suspend the colony in 10 µ ...

Kitto Lab The University of Texas at Austin http://research.cm.utexas.edu/bkitto/Kittolabpage/Protocols/Microbiology/electroporation.html This procedure prepares glycerol stock cultures of bacteria fo ...

质粒DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。

根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的 ...

快速细胞破碎法实验步骤 1、 挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。 2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。 3、 加入70μl Cracking Gel缓冲液20%SDS 10ml 250mmol/L EDTA 1.6ml蔗糖27.2g 1.2%溴酚蓝1.67ml，加双蒸水 ...

1、 存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80°C冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。 1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80°C冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD Falcon 的14ml聚丙烯圆底试管：在转化实验中使用圆底14-ml BD Fa ...

致癌化学物转化细胞： 转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验 实验步骤： 1、 取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中，接种密度10～20×106/75cm，37℃培养2～3天，在顺利情况下能迅速长满瓶面。 2 ...