• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        感受态细菌的使用

        互联网

        10353

        一、对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行):

        1. 在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了),如果检测感受态细菌的效率,加入100pg-10ng质粒,但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物,每100微升感受态细菌加入10微升连接产物。

        2. 轻轻用手指弹动离心管,以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放置30分钟。

        3. 42℃水浴,热休克2分钟。

        4. 热休克后立即置于冰水浴中,2分钟。

        5. 加入900微升LB,37℃200rpm培养1小时。

        6. 如果检测感受态效率,取100微升涂布到含有相应抗生素的LB平板上。如果转化的是连接产物,2000-3000g离心1分钟或更长时间使细菌充分沉淀下来。去除约900-950微升LB培养液。细菌沉淀用余下的LB培养液重悬,然后全部涂布到含有适当抗生素的LB平板上。37℃培养过夜。

        二、对于质粒的转化:

        1. 融解感受态细菌,加入不少于50ng质粒到50或100微升感受态细菌中。质粒的量可以是1微克或更多,但体积不宜超过感受态细菌量的10%。

        2. 轻轻用手指弹动离心管,以混匀细菌和质粒。冰浴或冰水浴放置10分钟。

        3. 取全部菌液直接涂布到含有适当抗生素的LB平板上,37℃培养过夜。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序