DNA原位杂交技术

从DNA序列查询单核苷酸多态性(SNP)的存在 用户可以应用Ensembl网页，选择适当的物种，通过关键词的搜索或通过针对基因组数据库BLAST查询的序列得到相关的基因组区域。在这两种情况下，用户通过点击在EnsemblGene Report页面上“Genomic Location"条框中的连接，可查询感兴趣基因的ContigView，在这个条框中，用户可以看到对于整个染色体而言的感兴趣基 ...

组织化学与免疫组织化学染色标本的石蜡包埋组织化学与免疫组织化学染色标本常用石蜡切片和冰冻切片。对于柔软的胚胎组织或脑也可用琼脂包埋后振动切片机切片。 用于免疫组织化学染色的石蜡切片(paraffin secdon)与常规HE染色的石蜡切片基本 制片过程相同。石蜡切片的优点是组织结构保存良好，结构清晰，能连续切片，抗原定位准确，更适合回顾性研究。固定好的组织在切片前要经石蜡包埋封 ...

防脱片处理步骤《一》载玻片和盖玻片的处理将载玻片或培养用的小盖片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95％乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。《二》黏附剂的使用 1．多聚左旋赖氨酸(poly-1―lysine) 首先配制0．1％(ω/υ) ...

三维空间内随机抽样 我们不难发现对于所进行观察的切片，体视学有着自身的规定。同时，从统计学角度出发，不可能只在一张切片上观察计算便得到关于整个特征物的准确三维定量信息，故体视学必然存在其特有的抽样原则，而这些原则必须有效而且切实可行。体视学可称为形态结构的统计学，体视学测试过程，实际上是抽样过程。下面介绍体视学对切片的要求和如何进行标本抽样。 在体视学中经常用到“无偏(unbiaas ...

抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulinIg)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为 IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda ）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma） ...

测序结果的判读

UV shadowing is a technique for visualizing nucleic acids separated on acrylamide/urea gels. The technique utilizes shortwave UV light (254 nm) and a fluor-coated TLC plate. We recommend UV shadowing ...

　　蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消 ...

I. Useful Values 1 mg/ml tubulin = 10 µM (assuming MW of ab-tubulin heterodimer is 100000; in reality it is ~110000 but almost all tubulin labs use this convenient conversion relationship) 1 µm of a m ...

I'm trying to do a southern blot and I have a trouble the bands I get are the same bands that appear in the genomic DNA digestion my probe is specific and it works in northern blot.Thanks -PPlopez- ...

一 酶切和电泳在200 μl 微量离心管中加入：25 μl DNA样品(约10μg)，3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl）5 μl 相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切充分，灌制0.8%的ag ...

1) 取10μl待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL，1.0%凝胶)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号， 拍照记录电泳结果(拍照时， 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A. 将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。C.将凝胶浸没入30mL变 ...

Protocol For the original protocol describing CGH see the article by Kallioniemi et al . For an example of how this technique has been utilized by the NCI Prostate Cancer Working Group see the section ...

点击浏览该文件Footprinting Analysis ...

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号，在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。这一技术为研究单一细胞中DNA和编码各种蛋白质、多肽的相应mR ...

分子生物学技术的突飞猛进发展，也推动了病理学的进展。原位杂交技术时分子生物学领域中最常用的基本技术方法之一，是核酸分子杂交技术中的一种。 核酸原位杂交技术最早应用于60年代末期，但当时仅限于对体外条件下啊核酸分子片段的初步工作，直到1975年才见到较为系统地介绍在细胞内进行原位杂交的技术。而在常规福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片中进行简便易行的原位杂交则是在80年代中后期。近年来，随着方法更为完善 ...

核酸样品经过直接点样或转移到硝酸纤维膜上，固定后，可以进行杂交反应。在杂交溶液中，硝酸纤维膜上变性的核酸样品和变性后的探针在一定的条件下形成双链杂交核酸分子。然后进行酶标显色。试剂及操作方法见本节　三。五、真核细胞基因组的制备从不同组织细胞或血细胞中提取是进行基因诊断的先决条件。制备的原则是既要将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净，又要保持分子的完整。蛋白酶K的应用使这两个原则得到了保证。在提取的反 ...

原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry，ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。

原位杂交，就是将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交。本文介绍了原味杂交的操作流程。

引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。