基因克隆

网络 第七节　真皮浸润细胞免疫表达 　　一、T淋巴细胞及其亚群的免疫表达 　　CD3（OKT3，Leu4）对T细胞特异，正常或肿瘤性B细胞不表达CD3；CD4RO（UCHL1）大多数T细胞和T细胞淋巴瘤呈阳性表达，能用于石蜡切片中。二者是常规筛选T细胞的良好标记物。成熟T细胞可分为表达CD4（OKT4、Leu3a）T辅助（TH/I）细胞、CD8（OK ...

网络 第六节　免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用 　　真皮结缔组织由数量不多的细胞和丰富的细胞外基质组成。细胞成分包括成纤维细胞、肥大细胞、巨噬细胞和少量淋巴细胞等。细胞外基质包括：①胶原：真皮中胶原纤维由I型和II型胶原构成，成熟真皮中I型胶原约占胶原的85%，越年幼的皮肤含III型胶原的比例越高。②弹性蛋白。③非胶原糖蛋白：如纤维粘连蛋白。 ...

网络 第六节　免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用 　　真皮结缔组织由数量不多的细胞和丰富的细胞外基质组成。细胞成分包括成纤维细胞、肥大细胞、巨噬细胞和少量淋巴细胞等。细胞外基质包括：①胶原：真皮中胶原纤维由I型和II型胶原构成，成熟真皮中I型胶原约占胶原的85%，越年幼的皮肤含III型胶原的比例越高。②弹性蛋白。③非胶原糖蛋白：如纤维粘连蛋白。 ...

网络 第五节　真皮与表皮交界 　　真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 　　一、基底膜带 　　（一）基底膜带（basement membrane zone BMZ）的结构 　　基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微镜下所见为0.5～1μm厚的均匀一致的紫红色带，称为表皮下基底膜带。 　　1．B ...

网络 第五节　真皮与表皮交界 　　真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 　　一、基底膜带 　　（一）基底膜带（basement membrane zone BMZ）的结构 　　基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微镜下所见为0.5～1μm厚的均匀一致的紫红色带，称为表皮下基底膜带。 　　1．B ...

网络 附录四　实验室常用技术参数资料 　　一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 ...

网络 附录四　实验室常用技术参数资料 　　一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 ...

网络 附录三　全血细胞培养染色体技术常用试剂配制 　　一、国内实验室应用试剂配制 　　（一）培养液 　　（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节　pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。 　　（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。 　　（3）植物凝集素（ ...

网络 附录三　全血细胞培养染色体技术常用试剂配制 　　一、国内实验室应用试剂配制 　　（一）培养液 　　（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节　pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。 　　（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。 　　（3）植物凝集素（ ...

网络 附录二　原位杂交组织化学常用试剂及处理 　　一、杂交前准备 　　（一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 　　DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理 ...

网络 附录二　原位杂交组织化学常用试剂及处理 　　一、杂交前准备 　　（一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。 　　DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理 ...

网络 附录一　免疫细胞化学常用试剂介绍 　　一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的 ...

网络 附录一　免疫细胞化学常用试剂介绍 　　一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的 ...

网络 第五节　“DNA指纹”与法医鉴定 　　1979年Teffreys根据β珠蛋白基因座位近旁出现的RFLP频率同测定的核苷酸总数，推算出人体基因组的遗传异质性约为每100个核苷酸中有一个差异。后在人体DNA随机片段的文库中分离出高度变异的超变区。从1982年起，分别在人的胰岛素基因，α类珠蛋白基因，肌动蛋白基因和C-Ha-ras-1基因中陆续发现了这些超 ...

网络 第四节　遗传病与肿瘤的基因诊断 　　从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，这对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 　　一、分离基因进行结构分析 　　利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系列技术， ...

网络 第四节　遗传病与肿瘤的基因诊断 　　从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，这对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 　　一、分离基因进行结构分析 　　利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系列技术， ...

网络 第三节　DNA重组实验中常用的技术 　　一、质粒DNA的提取及鉴定 　　（一）质粒DNA的提取及鉴定 　　1．收获细菌 　　（1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。 　　（2）将1.5ml培养物倒入1.5ml离心管中，用台式离心机于4℃以12000g离 ...

网络 第二节　分子克隆载体 　　载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。因此，作为载体应该满足以下几方面的要求：①有某种限制酶的一个切点，最好是有许多种限制酶的切点，而且每种酶的切点只有一个；②外源DNA插入后不影响载 ...

网络 第二十三章　DNA重组技术及其在基因诊断中的应用 第一节　工具酶 　　基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来，需要各种限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段连接起来，需要DNA连接酶（ligase）；要结合基 ...

网络 第二十三章　DNA重组技术及其在基因诊断中的应用 第一节　工具酶 　　基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来，需要各种限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段连接起来，需要DNA连接酶（ligase）；要结合基 ...