DNA提取与纯化

This procedure allows the concentration of DNA samples from dilute solution and the removal of unwanted salts from DNA samples.Materials3M Sodium Acetate buffer pH 5.2 (store at 4 °C) Cold 100% Ethano ...

DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活性， ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。 SDS(十二烷基硫酸钠) ...

【实验目的】 1．掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法 2．熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法 【实验原理】 1．DNA重组技术 重组DNA(RecombinantDNA)技术是遗传工程的核心技术，也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤： 1）重组DNA分子的构建：即将目的基因（DNA或cDNA片段）与载体DNA重组，应用TA克隆方法将PCR扩增产物快速 ...

①取0. 2g 各中药材样品分别用液氮( Ⅰ) 、玻璃砂( Ⅱ) 、氧化铝( Ⅲ) 研磨。②加入56 ℃ 10 倍预热的缓冲液C 于56 ℃温育30 min 离心 取上清液加入等体积氯仿- 异戊醇(24∶1) 抽提(室温 不能低于15 ℃ 否则CTAB 会沉淀) 10 000g 离心15 min。③取上清液加入1/ 10 倍体积缓冲液D 于室温下放置15 min 再用等体积氯仿- 异戊醇( ...

Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System品牌：Promega回收范围：100bp-10kb价格：（50次杭州的试剂杭州报价为562元，11元/次） Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且这个试剂盒的性能参数好得令人刮目相看！首先是100bp�10kb的回收率高达80%�95%（用于PCR产物回 ...

20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambrook和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA和EB染料观测DNA相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带 ...

MinElute Gel Extraction Kit 品牌：Qiagen回收范围：70bp-4kb价格：（50包装1485，约29元/反应）特点：洗涤体积只要10ul，回收产物浓度高，方便后继实验 使用方便快捷（wash-and-spin) 高回收率 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验使用心得： 如果要回收片断量本来 ...

一、 材料　　不同来源的DNA(50ng/ul)。 二、设备 　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5ml eppendorf管，电泳装置。 三、试剂 　　1、随机引物(10mer) (5umol/L)：购买成品。 　　2、Taq酶：购买成品。 　　3、10xPCR 缓冲液：配方见第八章。　　4、MgCl2 ：25mmol/L。 　　5、dNTP：每种2.5mmol/L。 四、操作步骤： 　　1. 在 ...

实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。 核酸定量可利用核酸会 ...

Verifying the sequence of an shRNA hairpin is essentialsince mismatch of even one nucleotide within the target sequence can ablate knockdown . An issue that is frequently encountered in the preparatio ...

虽然通过siRNA处理，整个基因的mRNA都受到影响，围绕siRNA周围的区域是受沉默影响最大的区域。就时效性研究来看，编码区是siRNA效应的最稳定区，非翻译区相对稳定性较弱。这与断裂位点和非翻译区之间的距离有关。因此引物最好选择在编码区内的任何位点，为了最大的灵敏度推荐使用围绕着siRNA位点进行设计。为了比较不同的siRNA针对不同的基因的相对沉默效果，最好在选择引物的时候用对于每个目的基因 ...

Nucleic Acids Research 2007 Vol. 35 No. 10 3339-3354S. Smit J. Widmann and R. Knighundefined Department of Chemistry and Biochemistry University of Colorado Boulder CO 80309 Understanding patterns of rRNA ev ...

用siRNA片段还是用shRNA质粒，这个要根据具体情况而定，两种方法都做是一种可行的方法，如果您经费足够。具体使用何种方法进行给药，这个具体情况具体分析，给您一个参考如下：

Reuven AgamiDivision of Tumor Biology - The Netherlands Cancer Institute - Amsterdam (TheNetherlands)r.agami@nki.nlWebpage: http://research.nki.nl/agamilab/Philippe BastinTrypanosome Cell Biology Unit ...

A major impediment in the treatment of neurological diseases is the presence of the blood–brain barrier which precludes the entry of therapeutic molecules from blood to brain. Here we show that a shor ...

不少的文献都说，用LiCl 沉淀RNA有很多好处，比如只沉淀RNA，不会沉淀DNA、蛋白和多糖等。但就是操作比较麻烦，比如，过夜沉淀，不能沉淀小分子RNA等。下面就LiCl 沉淀方法的误区进行探讨。误区一：LiCl 不能沉淀小分子RNA。很多文献都说LiCl 沉淀的RNA不含小分子的5s rRNA和tRNA。但，事实是这样吗？至少在我的实验中发现LiCl 可以沉淀小分子RNA。下面的图片更能说明L ...

Argonaute - A family of proteins containing multiple domains and involved in RNA interference (RNAi). Argonatue is the main component of RNAi effector complex the so called siRNA induced silencing com ...

刚涉及RNA抽提的新手都会听到别人说RNase很顽固，用高压灭菌都无法去除其活性。于是在配制tris缓冲液时就遇到了两难的境地。tris缓冲液不能用DEPC处理，只能用DEPC处理过的水配制，那么在药品称量、调pH值等过程中tris缓冲液会造到RNase的再次污染，所以是一个两难的境地。但是今天我要谈的是RNase并不顽固，高压灭菌可以去除其大量活性。下面的实验照片（照片来自ambion）很清楚的 ...

The BAC clone from glycerol culture sublibrary is innoculated into 3 ml of LB with 20µg/ml chloramphenicol and cultured at 37°C with shaking for 16hrs. The liquid bacterial culture is transferred into ...