• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        肝中DNA的分离与鉴定原理

        互联网

        1920
         

        细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在,其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中,核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol/L氯化钠溶液中的溶解度相差很大,核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度,脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后,用0.14mol/L氯化钠溶液抽提,可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠,可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。

         SDS(十二烷基硫酸钠)能使脱氧核糖核蛋白产生解聚作用,在含有脱氧核糖核蛋白的溶液中加入SDS,DNA即与蛋白质分离开,用氯仿将蛋白质沉淀除去,而DNA溶解于水相,最后用冷乙醇将DNA析出,而获得纯化的DNA。在氯仿中加入少量异戊醇能减少操作过程泡沫的产生,并有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白,下层有机溶剂相维持稳定。 DNA和RNA在波长260nm处有很高的吸收峰值,蛋白质则在280nm处有很高的吸收峰值。利用这个原理,我们测定纯化样品在260nm和280nm处的吸光度,可以推算出样品中DNA的浓度,并判断其纯度。用标准样品测得在波长260nm处,1ug/ml 双链DNA钠盐吸光度为0.02,单链DNA钠盐为0.025(光程为
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序