DNA提取与纯化

橙子童鞋 希望园子里做过DNA提取的战友们积极回帖啊，比如说一些提取过程容易出错的地方，需要特别注意的地方，很难搞定的步骤等。因为下个礼拜要做这个，头一次，希望大家讨论一下我做的时候可以借鉴。谢谢啦！lairena 你提的是什么的DNA，打算用什么方法啊？是自己配置的试剂还是商品化的提取试剂？duguke2004 去蛋白质，蛋疼的步骤！呵呵qingdaomdbio DEPC很重要啊，要选质量好的，其他的试剂耗材也要选用质量好的， ...

zqm0815 新鲜全血离心去掉血浆后，剩下的血细胞可以保存起来以后用于提取DNA吗？如何保存，可以保存多长时间？谢谢！lide658 可以用于提取DNA，我们是放在-20保存的，放-80也可以，一般保存2-3年都可以提取基因组DNA。业精于勤荒于嬉 可以用来提取DNA，保存的时间可以是很长的，尤其是放到-80度冰箱中。也可以提取后保存，DNA降解很慢，比较容易保存。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

sophiebaby 样品是经过陈化的烟叶，比较干燥的，其表面有一定量的微生物，我需要提取这些微生物的总DNA经过buffer浸泡和摇1h左右，得到烟叶浸出液，然后双层纱布过滤，离心收集沉淀，进行常规的细菌基因组提取步骤就是裂解、抽提什么的，大致上按照文献所述。但是我死活提取不出来，nanodrop只有很低的浓度，跑电泳没有完整的条带。我的下一步是要扩增16s的，有一两次有基因组条带，但是PCR也没有出来。试剂盒公司 ...

花樱雨 :~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳，结果做了几次都出下一下的情况：1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事？请高手指点我一下 不胜感激2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了以下附带我的电泳图zjubell 你的DNA提的没 ...

海之泪 有做过ChIP的高手不？我用冷泉港提供的protocol（http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/9/pdb.prot5279#R42）1. Add 27 μL of 37% formaldehyde per milliliter of cell culture (in growth medium on tissue culture plates or in tissue culture flasks) while slowly shaking the ce ...

师赠王老吉 在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？liushan8_9 白细胞或者红细胞的细胞膜应该是一样的吧。yyf87255300 在提取外周血DNA时，成熟的红细胞内没有核，所以裂解的外周血的白细胞，我们实验室用的裂解液是三蒸水zjubell 师赠王老吉 wrote:在提取血中DNA时，细胞裂解液是指？平常的细胞裂解液，还是白细胞或者红细胞的裂解液？看你这个词是出现在哪的。如果你 ...

tyuanc 我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA，提取的DNA直接跑胶，看不见任何条带，采用细菌16S rDNA通用引物（27F和1492R)进行PCR扩增，也没有结果，有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后，进行细菌16S rDNA的PCR扩增，扩增出了目的条带，我所用的酶为Takara的LA Taq，用普通的Taq酶扩增不出来，但隔了一周后再去重复，什么条件都一样，却再也扩不出来了，我重新提取 ...

对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiCl4.DEPC-water（抑制RNA酶活性）5. 3M NaAc (pH5.2)6. 96% 乙醇7. 70% 乙醇步骤：1.抽提缓冲液65℃预热；2. 加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min；3. 加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡 ...

DNA定量方法http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=485501&sty=1&tpg=26&age=0真核细胞DNA的制备与定量http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=455281&sty=1&tpg=31&age=0大量组织样品病 ...

DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯 ...

做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道） 血液保存：EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（提取感觉估计得到的可能不准），放的时间长也会降解一些。4°做好不要太长3天我是试过没有问题再长不知道了血凝块就算了吧太难了结果不 ...

因为以前只是用Trizol提取过培养细胞的RNA，加入氯仿后只需吹打即可，没有提全血RNA的经验。前几天要提全血拉，我看步骤说明里面，“加氯仿后剧烈震荡”，因为偶力气大，生怕把mRNA弄断了，就来了个不剧烈的震荡。跑完电泳一看，基因组DNA污染；RNA只见18S、28S条带，均模糊、断裂。我以为是Trizol过期了（上海生工产品），一边订新的，一边好奇，把全血改为400ul，把Trizol改为600ul（原来的量分别是2 ...

大家好，课题是结肠癌甲基化方面，我想先把DNA ,RNA和蛋白质提取出来保存，以下是我的初步方案，请大家不吝指教,谢谢哦！RNA 抽提1.匀浆处理将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%2.将匀浆样品在室温（15～30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3.每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。4. 4℃ 1200 ...

TRIzol法同时提取RNA,DNA,蛋白质TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用 ...

上海迈程医疗器械有限公司专业提供DNA/RNA快速提取试剂、HLA高低分辨分型（A,B,C,DR,DQ），B27位点检测及分子生物学耗材试剂。愿意真诚为您服务！请致电：18930640599 mail:jason725@139.com由美国德州生物基因有限公司（Texas BioGene,Inc）生产出新型新型HLA- ABDR SSP Morgan?试剂盒，该试剂根据亚洲人种特点而独特设计，可用于HLA I类A,B位点和Ⅱ类DR位点等位基因低 ...

1.蛋白酶K的作用：由真菌Tritirachium album Limber产生的蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作 ...

从外周血提取DNA是一个经常遇到的问题，当然可以用试剂盒提取，不过代价还是有点大，并且不方便，定试剂总要等上几天，如果血液标本不稀缺资源，不妨用一些简便方法提取。方法一(1)取抗凝血5ml在沉淀中加入15ml PBS，混匀，离心2000r/min10min。(2)将血浆转至新的试管中，-70℃保存。(3)将血细胞转入另一支试管中(10ml或50ml)加入尽可能多的冷的蒸馏水混匀。(4)将其插入冰内5～10min或放入-20℃15 ...

为特别鼓励，加两分！并继续跟踪！----mybbff近日打了一个关于核酸抽提的基础现状的草稿；没有去找参考书润色，所以会有点凌乱。首先声明的是：这篇东西只为有一定核酸抽提基础知识的人准备，同时也将会及时修改 (我突然发现了 edit 的功能)。那些分子生物学的过客，最好不要看本文；一是我的思维有点跳跃，二则是没有必要糟蹋自己的时间。写这篇东西的另外一个原因是，我一直在思考如何简化经典的无介质的核酸抽提程序。最经典的是裂解一步，去 ...

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可 ...

以Trizol说明书介绍的方法，将RNA和DNA的提取方法进行组合，同时提取RNA和DNA，RNA的纯度较高，可过1.9-2.0，而DNA的OD比值仅为1左右，请问各位有什么建议吗？以下是我的实验步骤，请各位指教。1.将培养板置于冰上，吸去培养液2.直接加入TRIZOL试剂(1ml/10cm2)，反复吹打3.将细胞裂解液转移到新的1.5ml Ep管中，室温放置5min4.加氯仿(0.2ml/1mlTrizol)，剧烈混匀15秒5 ...